生物化学第六生物氧化.ppt

这个假说是1964年由P.D.Boyer提出。该假说认为作为电子传递体的蛋白质有两种不同的构象：低能构象和高能构象。电子传递的结果使低能构象转变为高能构象，后者再将能量传递给F0-F1-ATP合成酶，使之也发生构象变化，从而推动ADP磷酸化形成ATP。这种假说有一定的实验根据，在电子沿呼吸链流动时，观察到线粒体内膜发生迅速的物理变化，但由于测定构象比较困难，支持这个假说的实验太少。 构象偶联假说 Conformational coupling hypothesis 英国生物化学家Peter D Mitchell在1961年提出化学渗透假说，认为电子传递释放的自由能和ATP的合成是与一种跨线粒体内膜的质子梯度相偶联的。即电子传递释放的自由能驱动H+从线粒体基质跨过内膜进入膜间隙，从而形成跨线粒体内膜的H+离子梯度，及一个电位梯度。这个跨膜的电化学电势驱动ATP的合成。 化学渗透学说 Chemiosmotic hypothesis ? ????????????????? 化学渗透假说的要点 1. 呼吸链上的递氢体与电子传递体交替排列，有序地定位在线粒体内膜上，使氧化还原反应能定向进行。 2. 呼吸链的复合体中的递氢体有质子泵的作用 它可以将H+从线粒体内膜的内侧泵至外侧。 3.线粒体内膜具有选择性，膜外侧的H+不能自由通过内膜而返回内侧,这样在电子传递过程中，在内膜两侧建立起质子浓度梯度(△pH)和膜电势差(△E),二者构成跨膜的H+电化学势梯度。质子的浓度梯度越大，则质子动力就越大，用于合成ATP的能力越强。 4.由质子动力驱动ATP的合成 线粒体内膜上嵌有F0F1-ATP合酶，其具有特殊的质子通道，当膜外侧的H+经此通道返回线粒体基质时，此时， F0F1-ATP合酶就利用电化学势能释放的自由能推动ADP和Pi合成ATP 由上述化学渗透假说可知，该假说必需具备两个条件：一是线粒体内膜必须是质子不能透过的封闭系统，否则质子梯度将不复存在；二是要求呼吸链和ATP合酶在线粒体内膜中定向地组织在一起，并定向地传递质子、电子和进行氧化磷酸化反应。 重 要 目前这两方面都获得了一些实验证据，例如能携带质子穿过线粒体内膜的物质（如2,4-二硝基苯酚）可破坏线粒体内膜对质子的透性壁垒，使质子电化学梯度消失。 另外根据测算，膜间隙的pH较内膜低1.4个单位，并且线粒体内膜两侧原有的外正内负跨膜电位升高。 重 要 四、 线粒体外NADH的氧化磷酸化作用 ? 磷酸甘油穿梭系统 ?苹果酸-天冬氨酸穿梭系统 酵解 （细胞质） 氧化磷酸化 （线粒体） 四、线粒体穿梭系统 ?-磷酸甘油穿梭 （线粒体基质） 磷酸二羟丙酮 3-磷酸甘油 磷酸二羟丙酮 3-磷酸甘油 FAD FADH2 NADH?FMN ?CoQ ?b ?c1 ?c ?aa3 ?O2 NADH NAD+ 线粒体内膜 （细胞液） 磷酸甘油穿梭系统 通过3-磷酸甘油与NADH之间的转换，胞液中的NADH间接地转变为内膜上的FADH2，经由内膜上的3-磷酸甘油脱氢酶(也是以FAD为辅基的黄素蛋白)进入FADH2呼吸链。 这种方式不通过复合物Ⅰ,因此只生成1.5分子ATP。 四、线粒体穿梭系统 苹果酸穿梭系统 谷草转氨酶，苹果酸脱氢酶，以及一系列的透性酶。 通过苹果酸与草酰乙酸之间的转换，间接地将细胞质中的NADH转变为线粒体内的NADH，从而进入NADH呼吸链。 这种方式要通过复合物Ⅰ。 四、线粒体穿梭系统 苹果酸-草酰乙酸穿梭作用 细胞液 线粒体内膜体 天冬氨酸 ?-酮戊二酸 苹果酸 草酰乙酸 谷氨酸 ?-酮戊二酸 天冬氨酸 苹果酸 谷氨酸 NADH+H+ NAD+ 草酰乙酸 NAD+ 线粒体基质 苹果酸脱氢酶 NADH+H+ Ⅳ Ⅰ Ⅱ Ⅲ 苹果酸脱氢酶 谷草转氨酶 谷草转氨酶 （Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ、 Ⅳ为膜上的转运载体） 呼吸链 1. 解偶联剂 解偶联剂（uncoupler）是指那些不阻断呼吸链的电子传递，但能抑制ADP通过磷酸化作用转化为ATP的化合物。它们也被称为氧化磷酸化解偶联剂。 解偶联剂不抑制电子传递。不抑制底物水平的磷酸化。 化学解偶联剂：2、4-二硝基苯酚 五、氧化磷酸化的解偶联和抑制 化学解偶联剂：2、4-二硝基苯酚 （2、4-dinitrophenol,DNP） DNP在pH=7的环境中以解离形式存在，是脂不溶的，不能过膜。 在酸性环境中接受H+，成为不解离形式，是脂溶性的，很容易过膜，同时将H+带入膜内，起消除质子浓度梯度的作用。亦称质子载体。