番茄红素预处理对大鼠短暂性全脑缺血再灌注的神经保护作用.docVIP

番茄红素预处理对小鼠短暂性全脑缺血再灌注的 神经保护作用：Nrf2/HO?1信号通路的作用 天津第四中心医院，神经科，天津 300140 山西医科大学传染病教学与研究部门 山西太原 030001 摘要：目的 研究番茄红素对小鼠双侧颈总动脉闭塞（BCCAO）的神经保护作用和此过程中Nrf2/HO?1信号通路的影响。方法 取60只C57BL/6小鼠，12w，体重20-24g，随机分成3组：对照组，BCCAO组，BCCAO+番茄红素组。 分别在BCCAO建模后的24、48、72h进行神经功能缺损评分。HE染色法和TUNEL法测定神经细胞存活率。测定谷胱甘肽含量（GSH）和活性氧自由基含量以研究氧化应激反应。Western-blotting测定细胞核、胞浆内核转录因子E2相关因子（Nrf2）含量和血红素加氧酶1（HO-1）的含量。结果 番茄红素明显改善了BCCAO小鼠的神经功能缺损评分。TUNEL法显示，番茄红素减少了大脑缺血引起神经细胞的凋亡，降低了的氧化应激反应。番茄红素上调了Nrf2和HO-1表达，表明番茄红素对神经系统的保护作用可能与Nrf2/HO?1信号通路有关。研究表明番茄红素通过它的抗细胞凋亡功能和激活Nrf2/HO?1信号通路保护大脑缺血性损伤。 引言：脑缺血中风是目前全球范围内脑血管疾病的主要原因，并表现出高发病率和死亡率。暂时或永久性大脑血管闭塞引发脑缺血中风，从而导致神经元坏死和相关的行为缺陷，包括感觉运动功能障碍、空间定向障碍和学习记忆能力障碍。中风的根本机制是氧化应激反应、血脑屏障功能紊乱、神经细胞凋亡和炎症的发生。虽然组织型纤溶酶原激活剂在临床上使用，并且是唯一的FDA批准的治疗缺血性中风的药物，但是它并不是对所有的患者都非常有效，只有少数患者在再灌注损伤的3小时内用药得到恢复。因此，其他有效的治疗药物需要被开发。 番茄红素是广泛存在于番茄和其他红色水果中的一种胡萝卜素。根据报道，番茄红素对于多种疾病具有生物学功能。番茄红素作为一种高效的抗氧化剂可保护细胞脂质过氧化和DNA氧化造成的损伤。另外，番茄红素具有抗细胞凋亡、抗炎、抗淀粉样蛋白、抗脑缺血、抗肿瘤的活性。番茄红素具有高脂溶性，所以能透过血脑屏障。它被证明对于老年痴呆症等神经功能紊乱的疾病也有疗效。本研究目的是为了证明番茄红素具有治疗其他大脑疾病的潜力。 氧化应激反应在脑缺血性中风中有重要的意义，其特征是活性氧自由基的显著增加。正常情况下，机体的抗氧系统保护细胞来自氧化应激的损伤。在许多组织和器官中，抗氧化剂/亲电反应元件（ARE）调控的第Ⅱ相解毒酶和抗氧化剂是参与降低增加的氧化应激和保持的氧化还原状态的主要的抗氧化途径之一。 血红素加氧酶-1（HO-1）是ARE调节的酶和抗氧化剂，它由氧化还原敏感性转录因子Nrf2的调节。HO-1可催化血红素分解为胆绿素、CO和铁。Nrf2被广泛报道具有保护脑缺血神经细胞的作用。正常情况下，在胞浆内Nrf2与Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）形成符合物以抑制Nrf2的活性。在氧化应激情况下，Nrf2与Keap1分离进入细胞核，与抗氧化反应元件ARE结合，启动ARE调控的第Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因表达，包括HO-1，NAD(P)H（奎宁氧化还原酶1和谷氨酸半胱氨酸连接酶）。 本研究是为了证明，在BCCAO模型中，番茄红素是否发挥了保护神经的功效，如果有，是否调控了Nrf2/HO?1信号通路。 材料和方法 动物 C57BL/6小鼠60只，12w，体质量20-24g，由天津医科大学动物实验中心提供（中国天津）。小鼠于光控环境下饲养（12h光/暗循环），允许自由进食和水。本实验经过天津医科大学伦理协会同意。本研究中使用的所有动物均按照美国国家卫生研究院发布的实验动物的护理和使用指南照顾饲养。 全脑缺血模型制备 根据之前的报道，本实验建立BCCAO模型作为全脑缺血模型。手术期间采用单盲法，即由一名不知道实验分组的实验者实施动物手术。小鼠采用 3%的异氟醚进行麻醉诱导，手术期间异氟醚（美国巴克斯特的迪尔菲尔德中学提供）维持浓度在 1.5%。异氟醚由一个通过适合动物的额区的面罩传入。在颈部和胸骨之间开一个正中切口并暴露气管，两侧的颈总动脉位于胸锁乳突肌的侧方，小心的将两侧的颈总动脉与周围的组织和迷走神经分离开，用两个微型动脉夹结扎两侧的颈总动脉，20 分钟后移去动脉夹，使血流再灌注。Sham 组小鼠采用相同的麻醉方式，但仅暴露、游离颈总动脉不做结扎。手术过程中，用温度探针监测颅骨膜的温度，并用恒温台将小鼠体温维持在 37-37.5℃。手术结束后，小鼠置于(30?33?C)恒温箱下以避免体温降低造成的实验偏差。 给药方法 BCCAO+番茄红素组，于术前连续七天腹腔注射番茄红素20mg/kg。假手术组、模