翻译日本锦鲤感染嗜水气单胞菌引起的相关病毒血症的组织病理学观察.doc

日本锦鲤感染嗜水气单胞菌引起的相关病毒血症的组织病理学观察 摘要：嗜水气单胞菌感染引发相关ANA-AKI-BYO病毒血症是目前在日本锦鲤有高度传染性的一种疾病。当前的研究，是为了确定电晕状病毒和A之间的相互关系。我们通过患病鲤鱼与正常鲤鱼之间的自然同居进行细菌的人为传染实验发现正常鲤鱼皮肤已被轻微受损。实验成功表现出电晕状病毒病毒血症和A的联合作用。在嗜水气单胞菌的感染中。患病的鲤鱼表现出规模囊性水肿，腹水及眼球突出，皮肤形成溃疡等症状。另外还有由于电晕状病毒和A引起感染的病理变化。发生嗜水气单胞菌感染后，全身水肿的皮肤表现出表皮分离，扩大规模液囊，以及真皮水肿并伴有出血和坏死。底层横纹肌水肿且肌肉纤维发生明显萎缩。肝细胞发生萎缩或肿胀呈颗粒状。肾小管细胞呈空泡变性，混浊肿胀，坏死和损伤。在脾和造血组织的巨噬细胞以及肝细胞中发生铁血黄素沉积。因为细菌细胞不直接侵入这些受影响的组织，所以这些变化可能受细菌毒素诱导。 关键词：病毒血症 科罗纳类病毒 嗜水气单胞菌 鲤鱼 皮肤溃疡 全身水肿 肾病 简介 据最近报道，一种新的病毒病，viremia - associated ANA-AKI-BYO，，在日本锦鲤中普遍流行（宫崎等，2000）。我们确定首次患电晕状病毒（CLV）血症的患病鲤鱼是受到水传播的二次细菌入侵，导致皮肤溃疡的形成。且CLV对鲤鱼本身是致死的。 1999年，通过长期观察发现患病鲤鱼出现规模囊水肿，眼球突出，腹水以及皮肤溃疡等症状。另外可以从病变真皮和内脏器官分离的CLV，从水肿鳞片囊，溃疡性病变和腹水中分离嗜水气单胞菌。病毒血症CLV与嗜水气单胞菌联合感染并不令人意外，因为它之前已被大众所知。虽然病毒和细菌，以及其病理特征之间的相互关系尚未完全确定，但众所周知，患病鲤鱼患有“鲤春病毒血症”（Rhab- dovirus鲤鱼感染，Fijan等1971）常常是因为感染嗜水气单胞菌。而复感染被称为“传染性水肿（Fijan1972）。 在本研究中，这种复杂的疾病被发现在饲养有高度传染性鲤鱼群的池塘中。因此，我们进行感染实验以确定病毒和细菌是如何被同居的自然患病鲤鱼传染给皮肤已经轻微受损的健康鲤鱼。结果发现，合并感染成功实现。并通过电子显微镜检查病鱼组织，观察其复杂的病理特征来确定疾病与CLV和嗜水气单胞菌之间的相互关系。 材料与方法 患病的鲤鱼和鲫鱼的健康：患病鲤鱼（3岁龄，200?300克），；来至于饲养在1999年6月和七月之间的寒春的鱼群中，通常表现为水肿但不发生皮肤溃烂。在六月收集五条病鱼进行组织病理学检查和病毒和细菌分离。七月，从同一组的鱼中再次收集16条病鱼作为供体进行感染实验。为实验从池塘中挑选未感染“viremia-associated ana-aki-byo”病毒的健康鲤鱼（2至4岁龄）。这些鱼立即以50ppm的福尔马林溶液浸泡24小时以除去皮肤和鳃上的寄生物。 感染实验：每两只皮肤溃疡且自然患病的鲤鱼被安置在6个养鱼池（30L 20℃）中通气，，而剩下的病鱼被放养在水箱中（300 L 20℃）。 在实验期间，当病鱼在养鱼池中死亡，需要从另备份组中选取另一条病鱼替换。同居前，去除掉几个身体受到轻度损伤的健康鲤鱼（2年生，40至70g）。在每一个养鱼池中，3或四只健康鱼与两条病鱼进行共同饲养。当实验鱼变得奄奄一息，立即清除它们，并更换新的实验鱼。这个实验中，在30?天20°C环境下，.共有30条实验鱼经历了同居实验。作为对照，6例健康鱼（2岁，50克）的皮肤已经损伤，以同样的方式作为实验鱼的健康鲤鱼（3岁，类似于自然病鱼的大小）也出现相同症状。 病毒和细菌的分离：根据宫崎等人的说法，CLV病毒是从天然病鱼和实验病鱼中分离出来的 （2000）。从溃疡性病变皮肤，水肿鳞片囊，腹水和肾中分离的细菌，在心脏浸液琼脂平皿上20℃下进行3天培养。对于大多数从水肿鳞片囊，腹水和肾脏的样品，采用API20测试生长在琼脂平板上单一类型的细菌是否是嗜水气单胞菌。这种细菌表现出对绵羊血琼脂平板上溶血活性。这显示出突出的均裂一些菌落选择人工感染。 人工感染嗜水气单胞菌：CLV的致病性在我们以前的研究（宫崎等，2000）有所描述。我们对分离的嗜水气单的致病性进行了检测。生物体在20℃下培养在心脏浸液肉汤（HI肉汤）48小时。离心培养物以3000×g的速度离心15分钟，使细胞悬浮在盐水上。向10条鲤鱼进行皮下注射菌悬液（0.5毫升），剂量为7.8×104.0 CFU ml-1。为对照，将5条鲤鱼注射相同量的无菌盐水。如后面所指出的，在HI肉汤培养所述细菌并不致病。我们试图在Luria-BERTANI肉汤（LB肉汤用于培养大肠杆菌;细菌蛋白胨10克，酵母提取物