津市发酵厂实习汇报要点.ppt

次碘酸钠法： 碘与NaOH作用能生成NaIO，而葡萄糖能定量地(1:1)被NaIO氧化在酸性条件下，未与C6H12O6 作用的NaIO可转变成I2 析出,因此只要用Na2S2O3 标准溶液滴定析出的I2 ，便可计算出未参与反应的NaIO ，由此推导出糖化酶催化所产生的C6H12O6 的含量。 1.I2 与 NaOH作用: I2 +2 NaOH=NaIO +NaI +H2O 2.C6H12O6 与NaIO定量作用: C6H12O6 +NaIO =C6H12O7 + NaI 3. C6H12O6反应完后,剩余的NaIO在碱性条件下发生歧化反应: 3 NaIO=NaIO3 +2 NaI 4.歧化产物在酸性条件下进一步作用生成I2: NaIO3 +5NaI +6H2SO4=3I2 +6Na2SO4+3H2O 5.析出的I2 可用标准Na2S2O3 溶液滴定之: I2 +2Na2S2O3 =Na2S4O6 +2NaI 注释： 在这一系列的反应中，1mol葡萄糖与1mol NaIO作用，而1molI2产生1molNaIO，因此，1mol葡萄糖与1molI2 相当。只要得出对照组和实验组所消耗的硫代硫酸钠体积，两者相减就可以得出与葡萄糖反应的那部分次碘酸钠的量，从而可以确定酶解生成的葡萄糖的量，从而计算出酶活。 I2 NaIO NaIO3 I2 完全歧化反应， 无葡萄糖 I2 NaIO NaIO另一部分 歧化反应 生成NaIO3 NaIO一部分与 葡萄糖反应 I2 对照组 实验组 次碘酸钠法步骤 1、先后加25ml淀粉稀释液、5ml醋酸缓冲液至比色管甲、乙中；40 ℃恒温水箱中反应5min； 2、取样品； 3、用纱布过滤样品，取滤液； 4、取2ml样品稀释液于比色管甲中，40 ℃恒温水箱中反应30min；比色管乙于40 ℃恒温水箱中反应30min； 5、先加4滴NaOH溶液、加2ml样品稀释液至乙比色管中；加4滴NaOH溶液至甲比色管中；放入冷水中冷却 。 6、吸取5ml比色管中反应液至已有少量蒸馏水的带玻璃塞的锥形瓶中；加入10ml 0.1%碘液； 7、加入15ml 0.1% NaOH溶液至带玻璃塞的锥形瓶中，盖好瓶盖，在瓶口喷洒少许蒸馏水，黑暗反应15min; 8、加2mlH2SO4溶液至带玻璃塞的锥形瓶中； 9、用0.5%硫代硫酸钠溶液滴定至无色，记录所用硫代硫酸钠的量 比色法：主要是利用紫外分光光度计测定还原糖葡萄糖的含量来测定酶活的 步骤：1、酶制备液 酶活力在4u/mL左右 2、吸取20mL20%淀粉溶液和pH6.0缓冲液5mL置于试管中，在恒温水浴器中预热平衡5min 3、加入酶制备液1mL立即记录时间，摇匀，准确反应5min 4、以0.1ml/L盐酸溶液0.5ml和稀碘液5ml的混合液作空白，于660nm波长下用10ml比色皿迅速测定吸光度根据吸光度查附表得出酶液的活力 紫外分光光度计 观察法原理：a-淀粉酶能将淀粉分子链中的a-１，４葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精，少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝色的特异反应消失而变成红棕色，其颜色消失的速度与酶活力有关，故可在标准条件下通过测定反应时间而算出酶活力。 观察法步骤 1、 酶制备液 酶浓度300—500u/mL； 2、吸取标准色溶液6mL于试管中，做比色标准 3、吸取20mL20%淀粉溶液和pH6.0缓冲液5mL置于试管中，在恒温水浴器中预热平衡5min， 4、加入酶制备液0.5mL立即记录时间，摇匀， 5、当反应接近2min时就开始不断用吸管取1mL反应液加至预先盛有稀碘液5ml的反应皿上， 6、当试管中反应液的颜色由紫变为红棕色与标准点相同时，即为反应终止。 试验后处理 清洗：没有乘装过淀粉的容器直接用水冲洗；装过可溶性淀粉的容器用刷子蘸上洗衣粉进行刷洗。干燥：容量瓶和锥形瓶直接放在窗前的架子上晾干，其它放入干燥箱里烘干。 报告完毕！！！ 谢谢！！ * 本模板来源于网络，由第一课件网整理发布，免费分享给大家使用。 第一课件网是国内最专业的PPT模板分享网站，所有模板均经严格测试，保证100%下载，100%精彩！ 更多精彩PPT模板，敬请访问 使用时删除此备注即可。 配色方案修改： 配色方案在【格式】--【幻灯片设计】--【配色方案】--【编辑配色方案】下调整。 LOGO的添加： Logo添加修改在【视图】--【母版】--【幻灯片母版】下调整。直接选择logo图片删除或修改。 字体格式的设置： 括标题和文本格式的设置在【视图】--【母版】--【幻灯片母版】下调整。 * * * * * 本模板来源于网络，由第一课件网整理发布，免费分享给大家使用。 第一课件网是国内最专业的PPT