细胞培养相关问题要点.pptxVIP

细胞培养产品概述;1 细胞体外培养;2 细胞体外培养的条件;2.1 细胞体外生存的营养条件;（3）碳水化合物 葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠等。 葡萄糖——主要的能源物质，细胞对葡萄糖的吸收能力最高。 丙酮酸钠——葡萄糖消耗殆尽时，可替代葡萄糖提供能量。;（4）无机盐类 细胞生长所必需； 维持渗透压平衡； 维持酸碱平衡——磷酸盐、碳酸盐等； Ca2+——组织内部细胞之间相互粘连起重要作用； Mg2+——细胞间质重要成分，利于细胞间相互稳定。;（5）维生素 脂溶性维生素：A、D、E、K； 水溶性维生素：C、B1、B2、B6、B12、生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素等； 参与构成各种酶的活性基团成分，参与细胞生存和代谢。 （6）促生长因子及激素 对于维持细胞的功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。 如胰岛素，它能促进??胞利用葡萄糖和氨基酸； 氢化可的松可促进表皮细胞的生长； 泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。 ;2.2 渗透压;2.3 温度;2.3 温度;2.4 PH;2.5 气相;3 细胞培养基的概念;4 培养基分类;4.1 天然培养基;4.1.1 血清的主要成分;4..1.2 血清的主要作用;4.1.3 血清的种类;4.1.4 牛血清;4.1.5 牛血清的分类;;4.1.6 血清的质量鉴定;4.1.7 血清的贮存与使用;（2）解冻;（3）血清的灭活;56℃灭活30min，规则摇晃 除非必须，一般不需要灭活 灭活会造成血清沉淀物显著增多，血清的质量下降;（4）血清使用浓度;（5）血清中的沉淀;4.2 合成培养基;4.2.1 BME ( Basal Medium Eagle);是BME的升级版 仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素 氨基酸浓度是BME的两倍 广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养;是Dulbecco改进的MEM 氨基酸和维生素的浓度是BME的4倍 最先葡萄糖的浓度是1g/L，称为低糖DMEM 后来增加到4.5g/L，称为高糖DMEM 主要用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养 高糖更适合高密度细胞培养，适用于附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养.;McCoy等人在1959年研制 是一种专门为培养肉瘤细胞研制的培养基 适用于原代细胞、组织活检细胞和淋巴细胞培养， 还适用于较难培养的细胞，如皮肤，牙龈，睾丸，小鼠肾脏，大网膜，肾上腺，肺，脾，大鼠胚胎和其他组织的原代生长，以及活体组织的体外移植。;是McCoy’s 5A 的改进版 含有高浓度的肌醇 广泛用于悬浮细胞的培养，如人类白细胞，骨髓瘤细胞，杂交瘤细胞等血液来源的细胞。;是DMEM和F12按1:1比例配制而成； 神经生物学最常用的基础培养基； 可作为无血清培养基的基础液； 适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。;是由 Iscove改良的Dulbecco培养基 较DMEM增加了几种非必需氨基酸、硒和一些维生素 最初用于培养红细胞和巨噬细胞前体 IMDM为营养非常丰富的培养液 非常适合于迅速增殖，高密度细胞的培养，包括Jurkat细胞，COS- 7，和巨噬细胞 IMDM支持小鼠B淋巴细胞，来自骨髓的造血组织，脂多糖刺激的B细胞，T淋巴细胞，和各种杂交细胞的生长 也可作为无血清培养的基础培养基;1950年由Morgan成功研制； 配方复杂，含有核苷酸，核酸等成分； 最初用于鸡胚肌细胞的培养； 还用于各种细胞的维持和病毒生产。;含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸 它可广泛应用于各种细胞类型 包括对营养成分要求苛刻的细胞。;4.2.10 Ham’s F10 (Ham’s Nutrient Mixture F10) 由Ham发明，用于人类2倍体细胞和仓鼠细胞的培养。 4.2.11 Ham’s F12 (Ham’s Nutrient Mixture F12): F10 的升级版，含有更多的维生素、肌醇和氨基酸 是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的 可以在加入很少血清的情况下应用 特别适合单细胞培养和克隆化培养 是无血清培养中常用的基础培养液 用于培养大鼠，兔子和鸡胚细胞，还用于中国仓鼠卵巢细胞以及肺细胞的培养;采用磷酸盐缓冲体系，氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。 适用于快速增殖瘤细胞的培养 用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株 ;4.2.13 其他培养基; 4.2.13 培养基的保存与运输;;4.3.1 无血清培养基发展历程;;第二代：无血清无动物衍生蛋白培养基;第三代：化学组分限定培养基——双无培养基;第四代：研发阶段;4.3.2 无血清培养基的应用;4.3.3 无血清培养基的组成及其主要补充因子;2、主要补充因子;;4.4 高级培养基（Adva