第二基因工程的载体和工具酶.pptxVIP

第二章 基因工程的 载体和工具酶;第一节 载 体;⑴载体必须是复制子。;（一）质粒载体的生物学特性 （二）质粒载体的制备 （三）质粒载体的改造 （四）几个常用质粒载体;;;;;（7）质粒的存在形式有超螺旋、开环双螺旋和线状双螺旋三种 ;（二）质粒DNA的制备;碱变性法质粒提取的原理;碱裂解法提取质粒;加入450μl的苯酚/氯仿/异戊醇，振荡混匀，4℃离心 12000g × 10min;溶液 I;溶液II;溶液III;25/24/1的苯酚/氯仿/异戊醇;2.5倍体积预冷的无水乙醇;TE缓冲液含RNase（50 ug/ml）;颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快 超螺旋DNA分子迁移率比线性DNA分子快 线性DNA分子比开环DNA分子快 线性DNA分子的迁移率与其分子量的对数值成反比;⑸改造或增加基因表达的调控序列。;（四）几个常用质粒载体;1. 质粒pBR322;pBR322 4363; 外源DNA;2. pUC质粒载体;2. pUC质粒载体;;;第二节 基因操作的工具酶;（一）限制性核酸内切酶的发现 （二）限制性核酸内切酶的分类 （三）限制性核酸内切酶的命名 （四） II型限制性核酸内切酶的基本特性 （五）限制性核酸内切酶的消化反应;;E.coliB含有EcoB核酸酶和EcoB甲基化酶;;最早分离出的限制内切酶—1968年，Meselson和Yua