蛋白质共价结构生物化学.ppt

第四章 蛋白质共价结构 蛋白质共价结构内容提要 §4-1 蛋白质通论 §4-2 蛋白质的共价结构-肽 §4-3 蛋白质一级结构的测定 §4-4 多肽与蛋白质的人工合成 蛋白质共价结构内容提要 重点： 肽的结构和性质 掌握： 肽段中氨基酸序列的测定方法 了解： 肽和蛋白质的人工合成 §4-1 蛋白质通论 蛋白质概念 蛋白质的化学组成 蛋白质的分类 蛋白质的大小和分子量 蛋白质的构象 蛋白质功能的多样性 蛋白质氨基酸顺序的遗传编码 一、蛋白质概念 蛋白质是由20种a-氨基酸通过肽键组成的高分子有机物. 二、蛋白质的化学组成 蛋白质由C、H、O、N四种元素组成，多数含有S，有的含有微量铁、铜、锌、碘和磷等元素。 各种蛋白质的含氮量都接近于16％ 蛋白质含量=蛋白氮 ? 6.25 6.25为蛋白质系数，即1克氮所代表的蛋白质量（克数） 凯氏（Kjedahl）定氮法测定蛋白质含量的基础。 三、蛋白质的分类 蛋白质分子形状： 球状蛋白质： globular protein 对称性好，溶解度高，能结晶，多数蛋白质属于此类； 纤维状蛋白质： fibrous protein 对称性差，分为：可溶性纤维状蛋白质（肌球蛋白）； 不溶性纤维状蛋白质（胶原蛋白、丝心蛋白等）。 蛋白质分子组成： 简单蛋白质： (simple protein) 完全由氨基酸构成，如胰岛素； 结合蛋白质： (conjugated protein) 由蛋白质和辅基组成，如血红蛋白等。 生物功能： 酶、结构蛋白、防御蛋白等。 四、蛋白质的大小和分子量 分子量变化范围 从大约6,000到1,000,000道尔顿(dation)或更大。蛋白质分子量的上下限是人为规定的。在表示蛋白质分子量时应说明测定方法(层析、电泳、质谱）。 有些寡聚蛋白质的分子量高达数百万甚至数千万，例如烟草花叶病毒（TMV），“分子量”约4×107。 五、蛋白质的构象 肽链形成的蛋白质的特有的空间结构即为蛋白质的构象。 如蛋白质二级结构：a-螺旋、β-折叠等。 六、蛋白质功能的多样性 作为有机体新陈代谢的催化剂（酶）。 生物体的结构成分(胶元蛋白)。 贮藏功能（作为生物体养料和胚胎或幼儿生长发育的原料。） 运输功能（血红蛋白）。 运动功能（肌动蛋白和肌球蛋白） 调节功能（激素） 参与高等动物的免疫反应（抗体和免疫蛋白）。 控制或调节遗传物质核酸的作用（组蛋白）。 七、蛋白质氨基酸顺序的遗传编码 三个连续的碱基顺序为一个密码单位即密码子或密码三联体，每个三联体代表一个氨基酸。 每条多肽链的氨基酸顺序由RNA的碱基顺序决定，而RNA的碱基顺序决定于DNA，因此一条多肽链的氨基酸顺序最终由DNA分子中的一段碱基顺序所决定。 §4-2 蛋白质的共价结构-肽（peptide） 一、蛋白质的一级结构 二、肽键的性质 三、肽平面 四、肽链的方向性 五、天然存在的活性肽 一、蛋白质的一级结构 1969年，国际纯化学与应用化学委员会（IUPAC）规定：蛋白质的一级结构指蛋白质多肽连中AA的排列顺序，包括二硫键的位置。 多肽链即为蛋白质一级结构的主体。-NCCNCC- 寡肽：由2-10个氨基酸组成的肽。 二、肽键（peptide bond） -C-N-比大多数C-N键短，具有部分双键性质，不能自由旋转。 -C-N-键上的H和O原子是反式的。 组成肽键的原子处于同一平面。 三、肽平面 -CO-NH-中的四个原子和与它相邻的两个Ca在一个平面上。 四、肽链的方向性 五、天然存在的活性肽（active peptide） 生物体内以游离态存在的分子量较小的多肽，这类多肽通常都具有特殊的生理功能。 如催产素、加压素、谷胱甘肽、脑啡肽、激素类多肽、抗菌肽、蛇毒多肽等。 谷胱甘肽 §4-3 蛋白质一级结构的测定 蛋白质的一级结构(Primary structure)包括组成蛋白质的多肽链数目、多肽链的氨基酸顺序，以及多肽链内或链间二硫键的数目和位置。 其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一级结构以来，现在已经有上千种不同蛋白质的一级结构被测定。 一、测定蛋白质的一级结构的要求 样品必需纯（97%以上）； 知道蛋白质的分子量； 知道蛋白质由几个亚基组成； 测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。 测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。 蛋白质一级结构测定的基本策略 1、测定蛋白质中多肽链的数目； 2、拆分蛋白质分子的多肽链，分离纯化各肽链； 3、拆开多肽链内的二硫键； 4、分析各肽链的氨基酸组成； 5、鉴