细胞工程花药和花粉培养详解.pptx

第7章 花药和花粉培养;主要内容;植物花药/花粉培养历史;花粉和花药的区别;花粉和花药的培养作用;（2）提高了目标基因型的选择效率? 例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 常规方法： AAbb出现的概率为1/16，并且不能将AAbb 与Aabb区分开。 ;（3）诱变育种中的作用 植株不受显隐性的影响，在诱变育种中能在当代及 时获得突变个体，加倍后成为稳定的纯系。? ;花药离体培养的过程：? ;7.1 花药培养;一、材料的选择;1.供体植株的基因型 材料的遗传背景对花药培养的影响很大，不同植物甚至不同品种之间对花药培养的反应都有差异，因此选择合适的品种常是培养能否成功的关键因素。如水稻中粳稻比籼稻容易培养。;2.供体植株的生理状态 供体植物生理对诱导频率有直接影响。如多年生植物中，幼年植物比老龄植物的花药诱导频率高；草本植物中生长健壮的花药诱导频率较高；烟草开花早期的花药比后期的更容易产生花粉植株；供体植株的生长条件对花粉发育及其对离体培养的反应也有重要影响。;3.花粉的发育时期 不同植物的花粉对离体培养有其特定的最敏感发育时期，因此，选择发育到合适时期的花粉是提高花粉植株诱导频率的重要因素。例如烟草和水稻的花粉从单核早期至双核期都可接受诱导；小麦和玉米处于单核期的花粉培养效果最好；而天竺葵则从四分体的花粉得到最佳效果。对于大多数植物来说，单核期的花粉比较容易培养。;发育时期;检查花粉的发育时期的方法： 染色法：如用醋酸洋红等染色制片，然后在显微镜下观察。;二、预处理;三、培养基;四、培养方式;2.双层培养：固体-液体双层培养基制作的方法是先在35mm×10mm的小培养皿中铺1-1.5mL琼脂培养基，待固化后在其表面再加0.5mL液体培养基，然后将花药接种在液体培养基中进行培养。 双层培养的优点是花药在培养早期可以从活性高的液体培养基汲取营养，花粉胚长大后不会沉没。可以在通气良好的条件下分化成植株。;3.花药-花粉分步培养：先将花药接种在液体培养基（含Ficoll）上进行漂浮培养，花粉可以从花药中自然释放出来，散落在液体培养基中。及时用吸管将花粉从液体培养基中取出，植板于琼脂培养基上，使其处于良好的通气环境中，可使花粉植株的诱导率大大的提高。;4.条件培养 利用条件培养基，即预先培养过花药的液体培养基进行花药培养，可使花药培养效率大大提高。;五、培养条件;六、花粉植株的倍性及染色加倍;倍性鉴定的方法有： 1、染色体直接计数法 通常取根尖、茎尖等分生组织区进行制片，直接计数染色体 数目。 2、间接鉴定 （1）扫描细胞光度仪鉴定（流式细胞仪） 主要测定叶片单个细胞 中DNA的含量确定细胞的倍性，材料的使用量可少到1cm2。 （2）细胞形态学鉴定法 单位面积上的气孔数及保卫细胞中叶绿体的大小和数目与倍性具有高度的相关性。 （3）植株形态学鉴定法 叶片保卫细胞大小、单倍体植株瘦弱，叶片窄小，花小柱头 长，花粉粒小，不结实。 ;（4）杂交鉴定法 自交或测交鉴定，看后代分离情况确定二倍体植株是来自小孢子还是体细胞。 （5）分子标记鉴定 包括生化标记（如同工酶标记）和分子标记（如RFLP、RAPD、AFLP等） ;染色体加倍 单倍体植株不能正常结实，只有经过染色体加倍、育性才能恢复，而且在遗传上是纯合的，为了获得更多的二倍体植株，除了有意识的利用上??自发的核内有丝分裂产生二倍体外，还需要通过人工方法使单倍体植株染色体加倍，成为纯合二倍体。 ;染色体加倍 （一）茎段培养 将单倍体植株的茎段进行培养，诱导愈伤组织形成。由于单倍体愈伤组织在培养过程中会有一定频率的 核内有丝分裂，从而形成二倍体细胞，分化出纯合的二倍体植株。 （二）化学试剂诱变 有秋水仙素、Oryzalin、trifluralin、APM等。 1、秋水仙素诱导 （1）浸泡法 无菌条件下以一定浓度的秋水仙素浸泡再生小植株，再转移至新鲜培养基中培养。 （2）生长锥处理 秋水仙素水溶液直接涂抹生长点（顶芽或腋芽）。 （3）培养基处理 将单倍体植株和任何一部分作为外植体，种植在附加一定浓度和秋水仙素的培养基中培养一段时间后，转入无秋水仙 素的相同培养基中继续培养诱导胚状体。 2、除草剂诱导 （毒性小，引起植株的变异几率小）;水稻花药栽培;水稻花药栽培;7.2 花粉培养;一、材料的选择和预处理;二、花粉的分离;二、花粉的培养方法;二、花粉的培养方法;7.2 花药和花粉培养中的白化苗问题;一、白化苗产生的因素;二、白化苗的控制;二、白化苗的控制;二、白化苗的控制;三、植物白化苗发展及研究状况;7.4、操作实例