遗传标记教案分析.ppt

FISH最初用于中期染色体。从正在分化的细胞核中制备的这种染色体是高度凝缩的，每条染色体都具有可识别的形态，它们染色后将显现出特征性的着丝粒位置及染色带型。在处理中期染色体时，通过测定FISH所获得荧光信号相对于染色体短臂末端的位置（FLpter值）来进行作图。使用中期染色体的不足之处在于，由于它的高度凝缩的性质，只能进行低分辨率作图，两个标记至少分隔1Mb才能作为分开的杂交信号被分辨出来（Trask et al.，1991）。这种分辨率不足以构建有交往的染色体图谱。故此中期染色体FISH主要用于确定新标记在染色体上的大概位置，为其他更精细的作图方法做准备。 一直以来，这些“其他方法”并不包括任一种FISH，但1995年后，一系列高分辨率的FISH技术已发展起来。这些技术通过改变待研究的染色体制备的性质而达到较高的分辨率。中期染色体对于精细作图来说凝缩度太高，因而我们需要选用较为伸展的染色体。有两种途径可以满足这一要求（Heiskanen et al.，1996）： 机械伸展的染色体（mechanically stretched chromosome）通过改变从中期细胞核中分享染色体的方法而获得。离心产生剪切力可将染色体伸展到正常长度20倍。每条染色体仍可识别，而FISH信号作图方法与通常处理的中期染色体相同，这样，分辨率可明显提高，能够区分出相隔200~300kb的标记。 非中期染色体（non-metaphase chromosome）染色体仅在中期高度凝缩，而在细胞周期的其他阶段保持天然未包装状态，有研究者曾利用前期细胞核，此时染色体凝缩程度足以区分出单个染色体。实际应用中，这种方法并无优于机械伸展的染色体之处。相比之下分裂间期（interphase）的染色体更为有用，因为分裂间期（再次细胞核分裂之间）的染色体包装程度最低。使用分裂间期的染色体，分辨率有可能达到25kb以下，但染色体形态特征消失，推动了定位探针位置所需的外部参照点。因此，该技术可在已获得染色体粗略图谱后使用，通常作为确定染色体一段小区域内一系列标记物顺序的方法。 间期染色体含有去组装的全部的细胞DNA分子。为了进一步提高FISH的分辨率到25kb以下，有必要放弃完整的染色体，而使用纯化的DNA。这种方法叫做纤维-FISH（fiber-FISH），利用凝胶拉伸或分子梳理技术制备DNA，可以分辨间距小于10kb的标记。 * * * 染色体结构变异体和非整倍体等细胞学标记材料常常具有特定的形态学特征，使其很容易与对应的二倍体区分开来。 * 1900年，Ehrlich和Morgenroth指出山羊红细胞表面存在抗原，并证明这些抗原具有个体差异。20世纪80年代初，人们转向白细胞抗原的研究，即主要组织相容性复合体（MHC）。动物的MHC的重要特性与疾病及生理性状具有重要关系。 细胞学标记的特点 优点：受环境条件的影响小，染色体研究的实验条件相对简单，结果快 缺点：（1）材料的产生需要花费大量的人力物力进行培养选择；（2）有些物种对染色体结构和数目的变异的耐受性较差，难以获得相应的标记材料；（3）某些物种虽然已有细胞学标记材料，但这些标记常常伴有对生物有害的表型效应，或有时观察和鉴定比较困难；（4）品种间染色体差异较小，除了个别多倍体（如三倍体等）品种外，染色体核型分析还不足以达到品种鉴定的目的；（5）尽管染色体的荧光显带技术能揭示染色体上微小差异，但目前的制片技术还不能保证快速、准确地获得理想染色体切片，这在很大程度上限制了对染色体的研究；（6）对于染色体数量多、染色体小的种种活物种，染色体核型不容易区分清楚，从而限制了遗传标记的应用 免疫遗传学标记(immunogenetical marker) 以动物的免疫学特性为标记，包括红细胞抗原多态性和白细胞抗原多态性。 生化遗传标记(biochemical genetic marker) 主要是指在同一动物个体中具有相同功能的蛋白质存在两种以上的变异体。 3、生化与免疫遗传标记 三、生化标记 是在蛋白质多态性的基础上发展起来的标记方法。可分为同工酶标记、等位酶标记、种子贮藏蛋白标记和免疫学标记。 同工酶：生物体内催化相同反应而分子结构不同的酶。 等位酶：由一个基因座位的不同等位基因编码的酶的不同分子形式 免疫学标记：以畜禽的免疫学特征为遗传标记，主要指红细胞抗原、白细胞抗原、胸腺细胞抗原等。 等位酶分析的过程 材料的采集 研磨和酶的提取 酶的保存 淀粉凝胶制备 电泳 凝胶切片 酶的组织化学染色 酶谱的记录与分析 数据分析 生化与免疫遗传标记的特点 与形态学标识和细胞遗传标记相比，数量更丰富，受环境影响更小，检测手段简便，是一种较好的遗传标记。 血液型和蛋白质型都是基因表达的产物，局限于反映基因组编码区的遗传信息，且标