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病理检验技术讲稿 一、组织切片常用仪器与制片技术 1、切片机及使用 切片机提供石蜡切片（或炭蜡切片）用，是切片中最常用的一种。超薄切片机的构造与使用原理基本也属于这一类型。（图4-1-1） 摇动轮的手柄转动重轮时，传动机内一组齿轮及螺纹中轴，使中轴前端的组织块固定架即按所调节的切片厚度（μm）向前推进，并上下运动，让组织块经过前下方 的轮时，传动机内一组齿轮及螺纹中，使中轴前端的组织块固定架即按所在切片操作 轴前先打开卡锁，否则重轮不能转动。 然后，将组 织块固定于固定架，最后再装切片刀。 组织块及 切片刀先后装牢固后才可掀开卡锁。 慢慢转动重 轮使装有组织块的中轴稍下降到接近刀刃处， 调 整刀的前、后进度，使刀刃即将接触组织块。 调 整刀的进度时，不让刀刃接触组织块， 以免第一 次切到时崩落组织块。此时将组织进度调节器，调 节到20μm，开始切片，待组织块切到所需的组织 图4-1-1 旋转式切片机? d= n sin? 其中d为分辨率，?为入射光的波长，n为透镜和物体间介质的折射系数，?为物体与物镜间所成夹角的二分之一，0.612为常数 2)、放大倍率：显微镜的放大倍率与其分辨力密切相关，它是人眼分辨力与显微镜分辨力之比，亦即：显微镜的放大倍率(m)=人眼分辨力d/显微镜分辨力d。人眼的分辨力为0.2mm，所以： 光镜的放大倍率(m)=0.2mm/0.2?m=1,000倍； 电镜的放大倍率(m)=0.2mm/0.2nm=1,000,000倍(100万×)； 当电镜的分辨力为0.5nm时，其m=0.2mm/0.5nm=400,000倍(40万×)。 从以上放大倍率的推算中可以看出，电镜分辨力的高低是评价电镜性能的重要指标。 3)、电子枪：发射电子束的装置为电子枪。其由上到下有阴极、栅极和阳极，在高真空的镜筒内好象三级电子管。阴极是金属钨做成的灯丝，给钨丝加上电流，烧到高温，钨丝就放出大量自由电子，这就是热电子发射。在高真空的环境下，受上万伏加速电压的作用和下面阳极的吸引，大量自由电子向下发射，形成电子束，电子束就相当于光镜的可见光源。 ●透射电子显微镜的基本结构 透射电镜的结构与倒置的光学显微镜基本相似。但由于电子束的特性与可见光不尽相同，故结构上仍有许多差异。其基本结构可分为电子光学系统、真空系统、供电系统、辅助系统四个部分。 1)、电子光学系统 电子光学系统包括：电子枪：电镜是以电子枪作为光源的，通常是在高真空中把钨丝加热，发射电子并加速到达样品；聚光镜：高性能电镜采用双聚光镜，目的在于提供最大亮度的电子束；调控系统：调节电子枪、透镜等各部件之间的对中合轴、调节照明亮度、放大倍率及聚焦等；样品室：样品室位于聚光镜和物镜之间，主要结构为：样品台、样品移动控制杆、冷阱及样品转换装置；成像放大系统：由物镜、一至三个中间镜和两个投影镜组成，可通过调节中间镜和投影镜的电流来改变不同的放大倍数，改变物镜电流对图像进行聚焦；观察记录系统：电子图像在投影镜下方的观察室荧光屏上转化为可见图像。当需要记录时，用屏下的照像机将电子图像摄下保留。 2)、真空系统 为防止电子散射、样品污染、提高灯丝寿命，在整个电子光学系统内部必须获得高真空度。其真空度至少要求达到10-5托以上。这就要求在开启电镜、更换样品及更换底片等操作完成后，一定要按一定的顺序将真空度抽提达到要求后方可进行下一步操作。主要包括：机械泵和扩散泵等抽气设备，真空检测装置和各种不同功能的阀门及控制系统。 3)、供电系统 供电系统是电镜成像的另一个重要部件。由供给电子枪、电子透镜、调控系统、真空系统等电源组成。整机消耗功率不大，但电压稳定要求高。 4)、辅助系统 主要是水冷系统，帮助冷却电子透镜和油扩散泵。（图：H-7500透射电镜外观结构模式图） 透射电镜的操作（略）：在电镜室见习时进行讲解。 2、超薄切片技术 超薄切片技术是透射电镜生物样品制备最基本的技术。 超薄切片技术过程：取材、固定、清洗、脱水、浸透、包埋、切片及染色等步骤。 1）、取材 取材是获得电镜优良图像的第一个关键步骤。取材总的要领是快、小、准、轻、冷。 (1)、标本要新鲜：不管是从麻醉或处死动物身上取材，还是临床手术取材，都应注意保持样品的微细结构，使其最大限度的近于生活状态。所以一定要目标明确，操作迅速，而且使样品必须在离体半分钟或最多2分钟内浸入固定液，以免时间过长，出现细胞自溶。 (2)、标本体积要小：一般用于电镜标本固定的固定剂穿透力都较弱，固定速度慢，所以要求组织块体积一般不超过1mm3，否则组织块中心部分得不到充分固定，易出现死后变化。 (3)、取材部位要准：由于电镜样品取材标本体积极小，必然有一定的局限性。所以取材的部位一定要准确可靠，同时还应注意材料的方向性，例如选