实验四叶绿素的提取分离及化学性质鉴定.docVIP

实验四、叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定 一．实验目的： 二．实验原理： 1、溶解性。 叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取 2、吸附性。滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同(？)，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。 当用适当溶剂推动时，混合物中各成分在两相（固定相和流动相）间具有不同分配系数，所以移动速度不同，一定时间后可将各种色素分离 三．实验材料: 新鲜植物叶片 器具： 研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm)一个，圆形滤纸（11cm和7cm)各一张，滤纸条一张 试剂：95%乙醇，石油醚 四．实验步骤: 1.色素提取（乙醇粗提液） a.取新鲜叶片洗净擦干，去中脉 称1g左右 剪碎于研钵 b.研钵中加3-5ml 95%乙醇研磨成匀浆 过滤于刻度试管 残渣用少许乙醇冲洗一并过滤 定容至10ml 注：研磨用石英砂或SiO2以利于充分研磨，加入CaCO3以保护叶绿素。 2.荧光观察 将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色 现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光 3.色素萃取（石油醚提取液） 取乙醇提取液5ml与另一支试管 加2ml石油醚摇荡 静止片刻上层深绿色为石油醚提取液 注：用丙酮提取会更好些，各色素在石油醚中溶解度不同 4.色素分离 a.将（11cm)圆滤纸中间剪一小圆孔 取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘与纸芯紧贴且露出少许，最好相平） 用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端 待风干后再滴加几次。 b.将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央 将插上纸芯的滤纸放在培养皿上纸芯下端浸入石油醚 迅速盖好培养皿。 c.推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置和名称 注：带宽和移动速度说明？ 答： 带 宽： 色素越多，色素带越宽溶解度高的移动速度快，就越接近滤纸上