牛乳微生物测定方法重点分析.docx

微生物的生长于繁殖的感念 生长—微生物细胞吸收营养物质，进行新陈代谢，当同化作用大于异化作用时，生命个体的重量和体积不断增大的过程。 繁殖-生命个体生长到一定阶段，通过特定方式进行新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 发育—从生长到繁殖，是生物的构造和机能从简单到复杂、从量变到质变的发展变化过程，这一过程称为发育。 个体生长—微生物细胞个体吸收营养物质，进行新陈代谢，原生质与细胞组成的增加为个体生长。 群体生长—群体中个体数目的增加，可以用重量、体积、密度或浓度来衡量。 由于微生物的个体极小，所以用群体生长来反映个体生长的状况。 个体生长—个体繁殖—群体生长 群体生长=个体生长+个体繁殖 平板菌落计数法 最常用的活菌计数法。将适当稀释的菌液倾注平板或涂布在平板表面，经保温培养后，以平板上出现的菌落数乘以稀释度就可以计算出原菌液的含菌量。 直径9CM的培养皿平板上出现菌落数一遍以50-500为宜。按照国家标准规定的样品菌落总数测定的计数原则，以平板菌落在30-300之间的为报告依据。 技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速，一般10-20分钟完成操作，严格无菌操作。 注意事项：每一支吸管只能用于一个稀释度，样品混匀处理，倾注平板时的培养基温度。 适用范围：中温、好氧和兼性厌氧，能在营养琼脂上生长的微生物。 误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品内菌体分布不均匀、以及不当操作。 微生物的个体生长和同步生长 由于微生物细胞及其微小，研究其个体生长存在着技术上的困难。 同步生长的概念：一个细胞群体中各个细胞都在同一个时间进行分裂的状态，称为同步生长。进行同步分裂的细胞称为同步细胞。 同步细胞群体在任何一时刻都处在细胞周期的同一相，彼此间形态、生化特征都很一致，因而是细胞学、生理学和生化学等研究的良好材料。 二、微生物的群体生长 1、无分支单细胞微生物的群体生长特征 无分支单细胞微生物主要包括细菌和酵母菌，其群体生长是以群体中细胞数量的增加来表示的。 由一个细胞分裂成为两个细胞的时间间隔称为世代，一个世代所需要的时间就是代时（Generation G）代时也就是群体细胞数目扩大一倍所需时间，有时也称为倍增时间。 下图表示的是一个细胞经过若干代分裂后的情况。 由下图可见，每经过一个代时，细胞数目就增加一倍，呈指数增加，因而被称为指数生长，这就是单细胞群体生长的特征。 指数生长可以用下式表示： 2、无分支单细胞微生物的群体生长曲线 以细菌为例介绍无分支单细胞微生物群体生长规律，其结论也基本适用于酵母菌。 生长曲线代表了细菌在新的环境中从开始生长、分裂直至死亡的整个动态变化过程。 每种细菌都有各自的典型生长曲线，但它们的生长过程却有着共同的规律性。一般可将生长曲线分为四个时期。 时期的划分：按照生长速率常数（growth race constant）不同 1、延滞期（lag phase） 其他名称：停滞期、调整期、适应期 1.1现象： 活菌数没增加，曲线平行于横轴 1.2特点： 生长速率常数=0 细胞形态变大或增大 细胞内RNA特别是rRNA含量增加，原生质嗜碱性增强 合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快）、易产生诱导酶 对外界不良条件敏感，如氯化钠的浓度、温度、抗生素化学药物 1.3原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物。 影响延迟期长短的因素 菌种：繁殖速度较快的菌种的延迟期一般较短： 接种物菌龄：用对数生长期的菌种接种时，其延迟期较短，甚至检查不到延迟期。 接种量：一般来说，接种量增大可缩短甚至消除延迟期（发酵工业上一般采用十分之一的接种量） 培养基成分：在营养成分丰富的天然培养基上生长的延滞期，比在合成培养基上生长的时短。 接种后培养基成分有较大的变化时，会使延滞期加长，所以发酵工业上尽量使发酵培养基的成分和种子培养基接近。 认识延迟期的特点及形成原因对实践的指导意义： 在发酵工业上需要设法尽量缩短延滞期： 采取的缩短延滞期的措施有： A、增加接种量：群体优势-适应性增强 B、采用对数生长期的健壮菌种： C、调整培养基的成分，在种子基中加入发酵培养基的某些成分 D、选用繁殖快的菌种 在食品工业上，尽量在此期间进行消毒或灭菌 2、对数期（logarithmic phase） 其他名称：指数期 2.1现象：细胞数以几何级数增加，其对数与时间呈直线关系。 2.2特点： 生长速率常数最大，即代时最短。 细胞进行平衡生长，菌体大小、形态、生理特征等比较一致，代谢最旺盛 细胞对理化因素较敏感 2.3影响因素： 菌种 营养成分 营养物浓度 培养温度 2.4应用意义： 由于此时期的菌种比较健壮，增殖噬菌体的最适菌龄；生产上用作接种的最佳菌龄。 发酵工业上尽量延长该期，以达到较高的菌