《微生物的实验室培养》()(新人教选修).ppt

选修1 专题二 课题1 微生物的实验室培养 二. 无菌技术 思考： 1. 什么是无菌技术？包括哪些方面？ 2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考） 3. 消毒和灭菌有何不同？ 4. 常用的消毒和灭菌方法有哪些？ 三. 实验操作---大肠杆菌的纯化培养 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板 （二）纯化大肠杆菌 最常用的接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法 结果分析与评价 课题延伸 选择培养基 * 课题1 微生物的实验室培养 微生物的实验室培养条件： （1）合适的营养和环境条件 （2）确保其他微生物无法混入 一. 培养基 1. 概念： 按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2. 种类： （按物理形态分） 液体培养基、半固体培养基 固体培养基 应用微生物分离、鉴定、计数和 菌种保存等方面 按照培养基用途分 选择性培养基 鉴别培养基 按照培养基的成分来分 合成培养基、天然培养基、半合成培养基 3. 成分： 思考： 各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？ 水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子） +满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求 C 无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防 止杂菌污染的方法。 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 C 3. 常用的消毒方法： 煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法 常用的灭菌方法： 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 ：100kPa 121℃ 15-30min 判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。 （1）豆浆 （2）游泳池 （3）超净工作台 （4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶 （5）培养细菌用的培养皿 （6）无菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培养基 （8）接种环、接种针（9）实验操作者的双手 牛奶 接种室、接种箱或超净工作台 接种工具，接种环、接种针或其他金属用具 玻璃器皿（吸管、培养皿） （冷却至50℃） 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 菌种的保存 1、临时保藏法： 对象： 温度： 缺点： 2、甘油管藏法： 对象： 温度： （P20） 频繁使用的菌种 4℃（冰箱） 容易被污染或 产生变异 长期保存的菌种 -20℃（冷冻箱） 接种环 接种针 倒平板 讨论1，2 讨论3，4 平板划线法 讨论2，3 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环： 每次划线前灼烧接种环： 划线结束后灼烧接种环： 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物； 杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少， 每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 涂布器