BDinflux使用流程_new_new要点解析.docxVIP

BD influx 使用流程 开机 开电源 打开空调--插上稳压器电源---打开稳压器电源开关—按起控制主机和电脑的插线板开关， 打开主机电源开关，然后开电脑开关，待激光器显示屏显示 standby，打开各个需要使用的激光电源，等待至少30分钟预热时间。 2. 双击电脑桌面上的BD FACS Sortware软件图标， 以启动软件(密码BISD#1)。 3. 开抽气泵电源开关（黑色按钮和绿色按钮） 拧紧鞘液桶上的排气阀，检查废液压力计，确保压力处于5” Hg到10” Hg间，如果压力低于5” Hg，检查废液桶盖是否盖紧并密封，如果压力高于10” Hg，降低真空装置压力水平，打开仪器上的Air switch 空气压力开关。 4. 反冲和排除管路的气泡 4.1将flush bucket放在Nozzle下面。 flush bucket 4.2 将debubble reservoir装满乙醇（或蒸馏水）放在flush bucket上面，一定将Nozzle的底尖没入液面。 debubble reservoir 4.3 当鞘液压力显示17.0左右时，按Purge使液流通过Nozzle流走并将气泡排出，然后将debubble reservoir装满水重复该步。 备注：（1）如果遇到难以排出的气泡，可以按Pulse，结束后自动转为Purge；（2）如果有顽固性气泡，需将Nozzle取下重新超声、冲洗、安装，确保O-圈密封好。 注意：一定确保debubble reservoir的液体浸没Nozzle Tip，如果液体快没有时，及时关掉Purge，加入液体。 4.4 先按RUN打开液流后，然后再移去Debubble Reservoir（不要先取出debubble reservoir），然后移开flush bucket。 4.5 用棉签擦干Nozzle Tip的液体。 4.6 检查液流是否垂直（用手电筒观察）。如果液流弯曲或不稳，重新清洗Nozzle和排气泡。 5 调机 3. 分选液流监视器 2．断点监视器 1．针孔监视器 5.1校准sort stream monitor 、Pinhole和液流 （1）确保三角瓶在液流排出管（废液收集管）下方 （2）取下flush bucket，以便液流能进入分选仓。 （3）按在小显示屏上的ILLUM键显示液流打入收集管中。？（没有印象按过这个键） 调节X轴使分选液流监视器中光斑左右，确定其在正中间 调节Y轴使分选液流监视器中光斑最亮（相当于侧向调节） （4）调节Nozzle上方的三个银色旋钮，通过Pinhole显示屏观察，使液流聚焦在Pinhole中央，而且要清晰聚焦，同时在图像顶部依稀可见Nozzle tip的图像。 488 561 355 640 调节此轴使针孔监视器中喷嘴稍微露出一点即可 调节前 调节后 调节此轴使针孔监视器中图像在最清晰状态（即聚焦调节） Z-axis(up/down) Y-axis (left/right) X-axis (focus) 调节此轴使针孔监视器中图像中的5个原点在孔道的最中间位置 （5）调节Nozzle上方的两个黑色旋钮使液柱打入废液槽中。 （6）反复4和5步使其最优。 Theta (side/side rotation) Phi(in/out rotation) 优化荧光通道 5.2 蓝激光（488nm）校准 （1）关闭Nozzle室门，放好小室的盖子。 （2） 打开机器左侧的蓝激光Shutter，（调蓝激光时关闭其他激光器的Shutter），手指点击小室门右上方的reset detector可看到激光。 （3）打开file—restore—workspace—100um喷嘴校正软件 （4）样品管中加入Ultra Rainbow beads (Spherotech Catalog No. URFP-30-2)，上样，一般1ml鞘液滴2-3滴Beads。同时确保样本压力比鞘液压力高1 psi，如不是1 psi调节sample offset旋钮。 （5）点击Sample按钮开始跑微球。开始时按几秒Boost加快上样。 （6）调节蓝激光的Z轴，观察Pinhole显示屏，让亮点位于第一个Pinhole的中央正上方，并使液流中心的微球闪亮。同时需调节蓝激光的Y-轴，使亮点位于中心且最亮。 488 Z轴 调节Y轴使针孔监视器中488nm激光光斑在最清晰状态 （7）调节sample offset以改变流速，直到在pinhole监视器上看到狭窄的中心液流，通常样本鞘液压力差在1 psi内（鞘液17.0 ，样本18.0）。 （8） 调节y轴，直到在pinhole监视器上看到最亮的信号 （