2012水处理微生物学实验要点解析.docVIP

2012．10．27 水10—1、2班 水处理微生物学实验 实验时间安排 星期六（2012、10、27） 水1班 上午8：30---12：00、 水2班 下午2：30---6：00. 每班又分为7小组，由班长把名单发到我的邮箱里hezhennana@126.com） 四个实验一起做，动手能力强的可能3个小时就够了，动手弱的要5个多小时或更长，所以选着小组时搭配起来比较好，5人的合作很重要，做完一个实验就要交上实验报告，提前复习填好内容，实验后把图或数字填上才能进行下个实验。） 实验一、普通光学显微镜的使用 标本图片、 结果：(1)绘图说明你所观察到的菌片的形态特征。 讲解：显微镜的使用。低倍镜的使用、高倍镜的使用。 实验二、酵母菌的形态观察 自制观察标本图片、 结果：（1）酵母菌死活细胞的检查 讲解：压滴法制片 问题：在酵母菌死、活细胞的观察中，使用美蓝染液有何作用？ 酵母菌和细菌细胞在形态、结构上有何区别？ 实验三、微生物细胞个数的直接计数法 讲解：酵母菌悬液制作方法， 血球计数板的使用与清洗，显微镜计数方法、 实验报告：（取液5个中方格共有80小方格）。 计数室 各中方格中微生物数目 微生物个数/ml 二室平均值 1 2 3 4 5 第一室 第二室 实验四、综合实验（无菌材料的灭菌前的准备与包扎、灭菌锅的消毒、样品的稀释液的制备、细菌的革兰氏染色） 标本：大肠杆菌 涂片→干燥→固定→染色（初染→媒染→脱色→复染）→镜检 问题：哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？ 其中最关键的环节是什么？ 水处理微生物学实验-能源与环境学院 实验一: 普通光学显微镜的使用方法 实验目的：1熟悉光学显微镜基本结构和用途； 2掌握低倍镜、高倍镜使用方法; 3掌握使用显微镜观察微生物的形态； 实验内容： 1.光学显微镜的构造 （1）、机械系统部分。（2）、光学系统部分。（3）、照明系统部分。 2.光学显微镜的使用 取镜 放镜 对光 放片 调焦(粗调焦和细调焦)。 3.实验器材：1显微镜、 2玻片标本、 3酵母菌、 4．载玻片、盖玻片、擦镜纸 、 5香柏油、二甲苯、 低倍镜的使用：先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。除少数显微镜外，聚光镜的位置都要放在最高点。如果视野中出现外界物体的图像，可以将聚光镜稍微下降，图像就可以消失。聚光镜下的虹彩光圈应调到适当的大小，以控制射入光线的量，增加明暗差。 高倍镜的使用：显微镜的设计一般是共焦点的。低倍镜对准焦点后，转换到高倍镜基本上也对准焦点，只要稍微转动微调即可。虹彩光圈要放大，使之能形成足够的光锥角度。稍微上下移动聚光镜，观察图像是否清晰。 油镜的使用方法：（1）将标本置载物台上，用标本推进器固定，将标本移于接物镜下。先用低倍镜找出标本位置，然后提高镜筒，在标本要观察的部位滴1滴香柏油后转换成油镜。 （2）从侧面观察并缓慢转动粗调节器，使镜头下移，直至油镜头浸没在油滴内接近玻片时为止。将眼睛移至接目镜，一边观察，一边缓慢调节细调节器，使镜筒上升（只能上升，不能下降，以防压碎标本片和损坏油镜），待看到模糊物像后再缓慢调节细调节器，直至清晰看到染色菌片时为止。 使用油镜时需要在玻片上滴加香柏油，这是因为：油镜的放大倍数远远高于透镜，至标本片透过的光线，因玻片和空气介质密度不同，而使部分光线经载玻片和空气折射后不能进入透镜，入射光线较少，物象不清晰。在油镜和标本片之间滴加与玻璃折光率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），使进入油镜的光线增多，视野光亮度增强，物象清晰。 问题思考： 对颜色深的标本与颜色浅的标本在观察过程中有何不同？ 如何根据观察对象使用镜头？ 为什么先用低倍镜观察 实验二、酵母菌的形态观察 实验目的：1、观察酵母菌的个体形态及出芽繁殖方式。 2、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。 实验原理：酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明显分化，个体比细菌大的多，酵母菌的形态通常有球状，椭圆状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷芽孢：酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会行成藕节状的假菌丝。 实验器料：1显微镜、 2玻片标本、 3酵母菌、接种针 4载玻片、盖玻片、擦镜纸 、 5香柏油、二甲苯、 制片方法： 取一洁净的载玻片，在载玻片同一位置滴加1滴酵母液和加一滴吕氏碱性美蓝染液，使菌体与染液均匀混合。用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片