常用药效筛选试验.ppt

抗皮肤衰老作用的实验方法 1.体外细胞培养实验 皮肤组织的细胞培养 2. 紫外线损伤皮肤模型的建立（整体实验） 对紫外线照射损伤的保护作用。 3. 其他：细胞的胶原合成定量测定、细胞色素抑制作用、药物对紫外线损伤皮肤细胞DNA短片化的检测、表皮细胞Telomer DNA的分析 端粒 老年痴呆 阿尔茨海默病：该病是最常见的痴呆症 病因学 遗传因素 微量元素 免疫反应 产生异常蛋白 慢性病毒感染 脑血流的改变 致病因素 Tau 蛋白 β -淀粉样前体蛋白 (βAPP) 通路 a. β -淀粉样前体蛋白 b. α, β, γ-分泌酶 c. 早老素 载脂蛋白 E (APOE) β -淀粉样前体蛋白 出现异常时，β-淀粉样前体蛋白的42aa片段颗粒能堆积在神经元间隙中，形成Alzheimer 病特异性的斑块 斑块可引起 中断 Ca++ 信号传递（意味细胞死亡 ？） 释放自由基，损害线粒体 激活免疫细胞，产生炎性反应，加重损害 阿尔茨海默病治疗药物分类 神经递质前体药；神经递质合成促进剂；神经递质分解酶抑制剂；乙酰胆碱受体激动剂；脑细胞代谢激活剂；脑循环改善剂；钙拮抗剂；肽类激素；神经营养因子；雌激素；抗氧化剂；非甾体抗炎药；抗Aβ(β淀粉样蛋白)药；中药 神经细胞的分离培养 大脑皮层神经细胞的分离培养 星形胶质细胞的分离培养 雪旺细胞的分离培养（促进轴突再生、 促进再生轴突的髓鞘化 ） 实验药物对神经细胞作用的观察 1、活体观察：贴壁、生长晕、细胞迁移、 细胞聚集、神经突起网络 2、组织学观察 3、电子显微镜观察：超微结构 4、免疫荧光法观察技术 哺乳动物脑内分布最广泛的一类细胞。呈星形，从胞体发出许多长而分支的突起，伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间，起支持和分隔神经细胞的作用 神经再生过程可分为三个阶段：轴突芽生；再生轴突的生长、延伸；恢复神经支配原靶器官 神经细胞的损伤体外模型建立 活性氧物质对神经细胞损伤的模型（H2O2） 缺血缺氧对神经细胞损伤模型的建立（体外，在培养细胞中加缺氧溶液） 其他模型： 咖啡因损伤模型 NO神经毒性损伤模型 NMDA （N-甲基-D-天冬氨酸）神经毒性损伤模型 谷氨酸神经毒性损伤模型 抑制神经细胞损伤的药效学作用观察 1、药物作用于细胞的形态观察 2、实验细胞的生物化学测定 MTT法活细胞测定 LDH和K+流出测定法测定细胞损伤程度 MDA测定法 Ca2+测定法（钙超载） 细胞凋亡率检测 3、PC12细胞对神经营养性活性物质的体外观察 4、试验药物对神经损伤模型的作用 老年痴呆体内动物模型的建立 基底大细胞核损伤模型：脑室注入胆碱能神经毒性物质 胆碱能神经元所致自身免疫性痴呆模型：白喉毒素结合的NGF（神经生长因子）致前脑胆碱能神经元损伤。 β-淀粉样蛋白和转基因动物模型 老龄动物模型 铝诱导痴呆模型 微量元素学说 铝盐可引起动物神经元产生类似该病中的神经纤维缠结退行性变。在该病患者大脑中的铝含量比正常人高出10至 30 倍即便通过饮水，也可导致铝盐的蓄积，从而致病。 痴呆病人多有胆碱能神经功能降低表现 。治疗可增加脑内胆碱和卵磷脂以诱导乙酰胆碱的合成；或用胆碱酯酶抑制剂。 寿命实验法 1、果蝇寿命延长实验法（随机分组） 2、家蚕寿命延长实验 观察指标：对寿命的观察（蚁蚕到结茧、茧子到出蛾、出蛾到产卵蛾死亡、总寿命） 体重和生长（2天1次）、蚕茧的质量测定 3、二倍体细胞寿命实验（成纤维细胞） 细胞传代培养：若接种传代3周内不再长成融合的单层细胞，则上一代即为细胞寿命。 观察：寿命长短，细胞密度（计数）和形态学变化（延迟出现衰老）。 凡是体细胞中含有两个染色体组的生物个体，均称为二倍体。人和几乎全部的高等动物，还有一半以上的高等植物都是二倍体。 寿命观察实验指标 体重、外貌、进食量和每天自然死亡数。 统计半数动物死亡天数、各期动物存活率（作生存曲线）、平均寿命、最高寿命。有条件可定期测定与衰老有关的生理生化指标。 1、存活曲线 2、半数存活时间 3、平均存活时间 4、最