02-博士研究生课——生命科学前沿进展——启动子和增强子-魏炽炬.ppt

Chapter 21 21.2 Eukaryotic RNA polymerases consist of many subunits. 真核生物的RNA聚合酶由多个亚基组成. RNA聚合酶I在核仁中合成rRNA. RNA聚合酶II在核质中合成mRNA. RNA聚合酶III在核质中合成snRNA, 5S RNA和tRNA. 21.3 Promoter elements are defined by mutations and footprinting. ?用突变法和印迹试验法确定启动子元件. 在合适的体外或体内检验系统中, 启动子是根据其附着序列产生转录的能力来进行定义的. 通过从一侧逐段缺失来确定启动子的边界. 当一段缺失不会阻碍RNA合成, 而下一段缺失使转录不再发生时, 那么我们可以确定启动子的边界必然存在于两者之间. 21.4 RNA polymerase I has a bipartite promoter. RNA聚合酶I启动子包括两个部分. RNA聚合酶I的启动子由一个核心启动子和一个上游元件组成. UBF1因子可以与上述两个区域结合, 这使SL1因子容易结合到启动子上. SL1含有TBP因子, 它参与所有三种RNA聚合酶的转录起始. RNA聚合酶I在核心启动子上与UBF1-SL1复合体相结合. RNA聚合酶I启动子含有一个核心启动子, 与上游启动子元件相隔约70bp,当UBF因子结合到UPE上时, 增加了核心结合因子结合到核心启动子上的能力, 而核心结合因子则使RNA聚合酶I定位于起始点上. RNA聚合酶III有三类启动子. 内部启动子有一个位于转录单位之内的短共有序列, 并使转录起始发生在离其上游一定距离的固定位置上. 上游启动子含有三个位于起始点上游的短共有序列, 它们能被转录因子结合. RNA聚合酶III的启动子可以由两个位于起始点下游的序列组成, 盒A序列和盒B或盒C序列相互分开;或者启动子也可由位于起始点上游的相互分开的序列组成(Oct, PSE, TATA). 21.6 TFIIIB is the commitment factor for pol III promoters TFIIIB是聚合酶III启动子的专一调节因子. TFIIIA因子和TFIIIC因子结合到共有序列上, 并能使TFIIIB因子结合到转录起始上. TFIIIB因子的一个亚基是TBP因子, 它能促使RNA聚合酶III的结合. 在聚合酶III的2型内部启动子中, 用结合到盒A和盒B序列上的TFIIIC来招募, 能征招RNA聚合酶III的定位因子TFIIIB. 聚合酶III的1型内部启动子中, 用结合到盒A和盒C序列上的装配因子TFIIIA和TFIIIC来招募能征招RNA聚合酶III的定位因子TFIIIB. 21.7 The startpoint for RNA polymerase II. ?RNA聚合酶II的转录起始点. RNA聚合酶II需要通用转录因子(称为TFIIX)来起始转录. RNA聚合酶II的启动子有一个位于起始点的短保守序列Py2CAPy3(起始子Inr). TATA盒序列是RNA聚合酶II启动子中的常见成分, 由离起始点上游约25bp位处的一个富含A-T的八聚体组成. DPE是RNA聚合酶II启动子的另一个常见成分, 但不含TATA盒. RNA聚合酶II的核心启动子包含Inr和一个TATA盒或一个DPE元件. 最小的聚合酶II启动子有一个位于Inr上游约25bp的TATA盒, 它含有TATA共有序列. 在起始点, Inr有着若干嘧啶(图中用Y表示)围绕在CA碱基前后. 图中, 序列所示为编码链. 21.10 The basal apparatus assembles at the promoter. 启动子上基本转录装置的装配. TFIID结合到TATA盒上是转录起始的第一步. 其他转录因子以严格的先后顺序结合到复合体中, 这样, DNA上被保护区域的长度随之延伸. 当RNA聚合酶II结合到复合体上时, 它就起始转录. 通过与转录因子以一定的顺序结合, RNA聚合酶II的转录起始复合体在启动子上装配. 21.11 Initiation is followed by promoter clearance. 转录起始后的启动子清除. 为了让聚合酶向前移动, 需要TFIIE和TFIIH因子来使DNA解链. CTD的磷酸化是起始延伸所需要的. CTD会协调RNA的转录加工. 为了让RNA聚合酶向前移动开始转录, 需要TFIIH的激酶活性来使CTD磷酸化. CTD对于招募各种酶来修饰RNA是很重要的. 21.13 Short sequence elements bind activators. 短序列元件结合激活剂.