同位素稀释超高效液相色谱串联质谱测定尿液中苯系物和三氯乙烯代谢产物.docVIP

同位素稀释超高效液相色谱串联质谱测定尿液中苯系物和三氯乙烯代谢产物 　　摘 要 建立同位素内标稀释，超高效液相色谱串联质谱（Ultra performance liquid chromatography-tandem mass sepctrometry， UPLC-MS/MS）同时测定尿中苯系物和三氯乙烯代谢产物的方法，并用于孕妇尿样的分析。尿样过经含同位素内标的醋酸铵缓冲液稀释10倍后，过滤，取滤液进样分析。采用C18色谱柱， 梯度洗脱进行UPLC分离，电喷雾负离子扫描多反应监测（Multiple reaction monitoring，MRM） 模式检测。方法检出限在0.0350～1.75 μg/L之间，方法的日内和日间精密度分别为1.2%～9.1%和2.0%～9.7%；用所建立的方法测定了650个孕妇尿液样品，并统计分析了其地区差异，加标回收率为85.0%～104%。所建立的方法快速灵敏，适合尿液样品的批量分析。 中国论文网 /8/view-7206855.htm 　　关键词 同位素稀释； 超高效液相色谱串联质谱； 苯系物； 三氯乙烯； 代谢物； 尿液 　　1 引 言 　　苯系物主要包括苯、甲苯、二甲苯、乙苯和苯乙烯等物质，在化工、建筑等领域应用广泛，主要对人体皮肤粘膜、中枢神经、造血功能等造成损害。其中，苯已经被世界卫生组织确定为强致癌物。三氯乙烯（Trichloroethylene，TCE）是一种优良的溶剂，广泛用于金属清洗、干洗剂、杀虫剂和萃取剂等。三氯乙烯对中枢神经系统有麻醉作用，亦可引起肝、肾、心脏等损害[1]。近年来，苯系物和三氯乙烯的污染问题受到人们的广泛关注。特别是孕期接触苯系物、三氯乙烯的孕妇，自然流产及发生先天畸形的危险性增高[2]。在对这些物质进行环境监测的同时，生物监测也十分必要，通过对生物监测指标的测定，可以在一定程度上说明人体对有害物质的接触水平。 　　苯系物的生物监测指标各不相同，苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯和乙苯的生物监测指标通常分别为苯巯基尿酸（苯酚、反式-反式粘糠酸）、马尿酸、甲基马尿酸（Methylhippuric acid，MHA）、苯乙醛酸 （Phenylglyoxylic acid，PGA）和苯乙醇酸（Mandelic acid，MA）。三氯乙烯的生物监测指标为三氯乙酸（Trichloroacetic acid，TCA）。其中，因在评价低浓度苯接触时，苯巯基尿酸（S-phenylmercapturic acid，SPMA）个体差异影响较小，用于生物监测具有较为明显的优势[3，4]，因此实验选择了苯巯基尿酸作为苯的监测指标。此外，马尿酸是甲苯的非特异产物，2013年美国政府工业卫生家协会（American Conference of Governmental Industrial Hygienists，ACGIH）已经取消其作为甲苯的生物监测指标，因此实验采用了它的特异性产物N-乙酰基-S-苯基-L-半胱氨酸（N-acetyl-S-（benzyl）-L-cysteine， BMA）作为监测对象；三氯乙酸亦非是三氯乙烯的特异性产物，因此增加检测了它的特异性代谢产物N-乙酰基-S-（1，2-二氯乙烯基）-L-半胱氨酸（N-acetyl-S-（1，2-dichlorovinyl）-L-cysteine，1，2-DCVMA、N-乙酰基-S-（2，2-二氯乙烯基）-L-半胱氨酸（N-acetyl-S-（2，2-dichlorovinyl）-L-cysteine，2，2-DCVMA）。 　　目前，我国职业卫生标准中，这些生物监测指标都是分别进行检测，多用高效液相色谱法[5～7]、气相色谱法[8～10]和分光光度法[11]，但生物样品基质通常较为复杂，用这些方法进行检测，样品基质干扰会造成准确度和灵敏度的下降。 结合UPLC的高分离效率和快速及串联质谱检测的高特异性的UPLC-MS/MS在痕量测定领域得到了广泛应用，极大地提高代谢产物测定的灵敏度和准确度。 　　为了同时测定尿样中苯系物和三氯乙酸的代谢物，且适应尿中基体复杂、含量低的特点， 本实验采用超高效液相色谱-串联质谱法，以同位素内标进行基质效应校正，建立简单快速同时测定尿样中苯系物和三氯乙酸代谢物的方法，与文献[5～11]相比，检出限降低2～3个数量级，更有利于痕量分析，为暴露人群的生物监测提供了有力的检测手段。将所建立的方法用于各地孕妇尿样的检测，初步分析了不同地区孕妇的暴露水平差异。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　Acquity超高液相色谱仪（UPLC，美国Waters公司），3200Q TRAP联用质谱仪（LC/MS/MS System，美国AB SCIEX公司）。 　　标准品（纯度≥98%）：苯巯