无菌操作技术讲义(一)(二).docVIP

无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制 实验目的： 1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法 2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌 3、掌握培养基的配制 一、实验用器皿的清洗及液的配制实验中所使用的玻璃仪器及塑料器皿清洁与否，直接影响实验结果，往往由于器皿的不清洁或被污染而导致较大的实验误差，甚至会出现相反的实验结果。因此，实验用器皿洗涤清洁工作是十分重要的基本操作，是做好实验的前提及实验成败的关键之一。 洗涤液的种类及配制 （1）0.5%去垢剂溶液（常用洗涤液）。 去垢剂是能使蛋白质变性的一类化学物。 去垢剂(表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质，一般具有乳化、分散、和增溶作用，可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型，中性去垢剂在蛋白提取钟应用的较多。[生化]去垢剂（detergent） A．中性去垢剂 又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇醚，如苄泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醚，如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌。中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱层析