3制药微生物培养基制备详解.pptVIP

高压蒸气灭菌影响培养基的有效成分甚至是活性。 较高温度下长时间灭菌，营养成分会破坏，甚至产生有毒物质。 磷酸盐与碳酸钙、镁盐、铵盐也能反应，生成沉淀或络合物，降低利用度。 维生素等不耐高温分解破坏、失活。 （4）控制灭菌操作： 发酵制药 培养基制备 2.4.3 制药生产用培养基的配制 一般设计原则 设计思路 计算与定量配制 优化 发酵制药 培养基制备 1、培养基设计一般原则 生物学原则：根据不同微生物营养和反应需求设计。 营养物质组成：较丰富，浓度适当。 成分之间比例：恰当，C/N比适宜，有机和无机氮 原料之间：不能产生化学反应。适宜的pH和渗透压 工艺原则：不影响通气搅拌、分离精制和废物处理，过程容易控制。 低成本原则：原料来源方便，质量稳定，质优价廉。 高效经济原则：满足菌体生长和合成产物的需求，最高得率，最小副产物。 发酵制药 培养基制备 2、 培养基设计基本思路与实验流程 起始培养基：根据他人的经验和使用。 单因素实验：确定最适宜的培养基成分。 多因素实验：各成分之间最佳配比和浓度优化。 中试放大试验：摇瓶、小型发酵罐，到中试，最后放大到生产罐。 综合考虑各种因素，产量、纯度、成本等后，确定一个适宜的生产配方。 发酵制药 培养基制备 3、理论计算与定量配制 微生物生长和生产可用下列表达式表示： 碳源和能源＋氮源＋其他营养物质→细胞＋产物＋CO2＋H2O＋热量 单位细胞生物量所需最小的营养物质: 单位产量的最小底物浓度: 发酵制药 培养基制备 碳源和氮源进行转化率计算和分析 初步计算：参考微生物的化学和元素组成。 转化率：单位质量原料生产的产物量或细胞量。 理论转化率：根据代谢途径的物料衡算 实际转化率：发酵过程中实际测量数值计算。 目标：使实际转化率靠近理论转化率。 发酵制药 培养基制备 例1 实验流程 考察不同碳源、氮源、磷酸盐浓度对菌株发酵摇瓶的影响 单因素实验 正交实验 确定最优碳源、氮源、磷酸盐浓度 摇瓶发酵 采用最优培养基，确定初始pH 中试验证 确定大宗原料培养基组成 生产发酵正交实验 无法从生化反应原理来推断和计算出最佳培养基配方 根据生理学和生物化学理论 参照前人所用的经验培养基 结合菌的特殊生物学和产品特征要求 进行大量细致和周密的试验研究 发酵制药 培养基制备 小结 培养基组成与作用：C、N、无机盐、水、生长因子、前体与促进剂、消泡剂 培养基制备与质量控制：固体、种子、发酵培养基 生产用培养基制备：原则、实验方案、优化 发酵制药 培养基制备 思考题 （1）培养基组成成分有哪些，有何作用？ （2）固体培养基、种子培养基、发酵培养基的组成特点及其如何衔接？ （3）如何研制生产用培养基？ 发酵制药 培养基制备 项目二 微生物发酵制药工艺 2.1 概述 2.2 微生物生长与生产的关系 2.3 制药微生物菌种建立 2.4 制药微生物培养基制备 2.5 灭菌工艺 2.6 微生物发酵培养技术 2.7 发酵工艺过程的检测与控制 2.4 培养基制备 ?概念 供微生物生长繁殖和合成各种代谢产物所需要的按一定比例配制的多种营养物质的混合物。 作用：营养作用；环境条件（渗透压、pH等）；稳定工艺控制（非营养成分，前体，促进剂，消沫剂）。 培养基的组成和比例是否恰当，直接影响微生物生长、生产和工艺选择、产品质量和产量。 发酵制药 培养基制备 碳源 氮源 无机盐 水 生长因子 前体与促进剂 消泡剂 2.4.1 培养基的成分 发酵制药 培养基制备 概念： 构成微生物细胞和代谢产物中碳素的营养物质。 作用： 为正常生理活动和过程提供能量来源，为细胞物质和代谢产物的合成提供碳骨架。 1、碳源 发酵制药 培养基制备 糖类：葡萄糖、淀粉、糊精和糖蜜 脂肪：豆油、棉籽油和猪油 醇类：甘油、乙醇、甘露醇、山梨醇、肌醇 蛋白类：蛋白胨、酵母膏 速效碳源：糖类、有机酸 迟效碳源：酪蛋白水解产生的脂肪酸 碳源种类 发酵制药 培养基制备 2、氮源 概念： 构成微生物细胞和代谢产物中氮素的营养物质。 作用： 为生长和代谢主要提供氮素来源。 种类：无机氮源、有机氮源 发酵制药 培养基制备 几乎所有微生物都能利用有机氮源： 黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、蛋白胨、酵母粉、尿素。 选择性利用无机氮源： 氨水、铵盐和硝酸盐。氨盐比硝酸盐更快被利用。 生理酸性物质：代谢后能产生酸性残留物质。 （NH4）2SO4利用后，产生硫酸 生理碱性物质：代谢后能产生碱性残留物质。 硝酸钠利用后，产生氢氧化钠。 发酵制药 培养基制备 3、无机盐和微量元素 概念： 组成生理活性物质或具有生理调节作用矿物质 作用方式： 低浓度起促进作用，高浓度起抑制作用。 种类：盐离子 磷、硫、钾、钠、镁、钙，常常添加 铁、锌、铜、钼、钴、锰、氯，一般不加