专题三课题季的花药培养精要.ppt

课题2月季的花药离体培养 被子植物的花粉发育 回顾旧知：花的结构 花的结构示意图 1 2 3 4 5 6 7 8 9 花柄 花托 子房 花萼 花瓣 花柱 柱头 花药 花丝 雄蕊 雌蕊 （花冠） 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 1、雄蕊 被子植物的花粉发育 药隔：花药中部，由薄壁细胞构成，内有维管束 花药 花粉囊（4或2） 囊壁 花粉粒 表皮 纤维层 2、花药的结构 （1）、花粉的概念 花粉是由花粉母细胞（小孢子母细胞）经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。 3、被子植物的花粉发育 （3）、花粉粒的形成 （2）、经历时期： 小孢子四分体时期、单核期、双核期等阶段 花粉母细胞 （小孢子母细胞） 4个小孢子 减数分裂 小孢子四分体 1个小 孢子 （单细胞花粉粒） 花粉粒 （双核） 有丝分裂 单核 双核 花粉母细胞 （小孢子母细胞） 4个小孢子 减数分裂 小孢子四分体 1个小 孢子 花粉粒 （双核） 有丝分裂 单核 双核 花粉管细胞核 营养细胞 生殖细胞核 2个精子 小孢子母细胞 小孢子 花粉囊 花药 花粉粒（双核期） 成熟花粉 8个精子 1、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（ ） A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的 B、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果 C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段 D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央 BD 取决：培养基中的激素种类及浓度配比 二、产生花粉植株的两条途径 胚状体 ——在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似； 神奇的人工种子 :通过胚状体途径形成小植株 烟草花药培养 胚状体发育途径 愈伤组织转接种到再生培养基 愈伤组织分化形成再生植株 水稻花药培养 愈伤组织发育途径 部分花药产生愈伤组织 接种在平板上的水稻花药 三、影响花药培养的因素 * a、不同植物诱导成功率不同 b、同一植物的不同生理状况（花期早期（初花期）＞后期） c、合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间） 2、培养基的组成 小麦中为N6，马铃薯、月季中为MS，油菜中为B5培养基 3、此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等 1、材料的选择 选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎； 选择单核期之后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药。 思考：1、其它时期选择的缺点？ 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。 3、为什么选择完全未开放花蕾？ 完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒 2、单核期花药如何挑选？ 4、为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 5、花药培养时间 一般月季的花药培养时间选在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及生理状态会比较好，可提高花粉的诱导成功率。 （一）材料选取 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。 1、从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的 花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色） 四、实验操作 （二）材料的消毒 5、无菌水冲洗3～5次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态 1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） 在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。 1、剥取花药 ①勿损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织。 2、接种 注意： （三）接种和培养 ①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 3、培养 ②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。 长出愈伤组织则将愈伤组织及