《实验15IAA的生物鉴定（芽鞘伸长法）》.docVIP

实验 15 IAA 的生物鉴定（芽鞘伸长法） 一、原理 将小麦胚芽鞘的切段，放在含有 IAA 的溶液中，这些切段可以继续伸长。切段的伸长在一定范围内与外加生长素浓度的对数呈线性关系。因而可通过测定切段伸长的量来测定样品中未知的生长素含量。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 小麦种子。 （二）试剂 1 ． 0.1 ％升汞溶液（或饱和漂白粉）。 2 ．含有 2 ％蔗糖的磷酸–柠檬酸缓冲液（ pH5.0 ）：称取 K 2 HPO 4 1.794 g ，柠檬酸 1.019 g ，蔗糖 20 g 溶于 1000 mL 重蒸馏水中。 3 ． 10 -3 mol/L IAA 母液：精确称取 17.5 mg IAA 于烧杯中，先用少量无水乙醇溶解后，再用水定容到 100 mL 。 （三）仪器设备 培养皿（直径 9 cm ） 5 套，带盖搪瓷盘 1 个，移液管 10 mL 1 支、 1 mL 1 支，镊子 1 把，刀片 1 个，带 mm 方格纸玻板 1 个，切割器 1 个，玻璃丝 25 根，半对数坐标纸，滤纸，绿色灯光 三、实验步骤 1. 选取成熟、饱满、大小一致的小麦种子 100 粒，用 0.1 ％升汞进行消毒后，将种子放在垫有滤纸的带盖搪瓷盘中，盘中加少量水，为了使胚芽鞘长得直，可将种子整齐地摆成横排，种胚向上，并一律朝向搪瓷盘的一侧，将搪瓷盘斜放成 40 ～ 45 o 角，使胚倾斜向下，加盖，放在 25 ℃温箱中生长。 2. 在温箱中生长约 3 天，当胚芽鞘长达 25 ～ 35 mm 时，选取 28 ～ 30 mm 幼苗作为生物鉴定的材料，因这样大小的芽鞘对 IAA 最敏感。 3. 用切割器在带 mm 方格纸的玻璃板上，切去芽鞘尖端 3 mm ，取下面 6 mm 切段作试验。 4. 将 50 个 6 mm 长切段立即放入盛有 2 ％蔗糖的磷酸–柠檬酸缓冲液的培养皿中，浸泡 1 ～ 2 h ，以除去切段中的内源激素。 5. 配制 10 -4 mol/L ， 10 -5 mol/L ， 10 -6 mol/L ， 10 -7 mol/L 的 IAA 的系列标准溶液。取五套洗净烘干的培养皿，编号分别对应加入下列溶液。 ① 吸取 10 -3 mol/L IAA 1 mL + 9 mL 缓冲液 → 10 -4 mol/L IAA 。 ② 吸取 10 -4 mol/L IAA 1 mL + 9 mL 缓冲液 → 10 -5 mol/L IAA 。 ③ 吸取 10 -5 mol/L IAA 1 mL + 9 mL 缓冲液 → 10 -6 mol/L IAA 。 ④ 吸取 10 -6 mol/L IAA 1 mL + 9 mL 缓冲液 → 10 -7 mol/L IAA 。 ⑤ 吸取 10 mL 缓冲液 → 对照。 6. 将胚芽鞘切段从缓冲液中取出，用滤纸轻轻吸干，将切段穿在玻璃丝上，每根玻丝穿 2 个切段（间隔一定距离，以留有生长余地），每一培养皿中放入 10 个切段，加盖，用黑纸包上，放在 25 ℃温箱中培养 24 h 。 上述操作均需在暗室中绿光下进行。 7. 取出芽鞘切段，用带有方格纸的玻板或在配有目镜测微尺的双目解剖镜下测量每个切段的长度，精确到 0.1 mm ，求出每种处理的平均长度。 8. 在半对数坐标纸上，以芽鞘切段增长％为纵坐标， IAA 浓度为横座标，作出标准曲线。 9. 如需鉴定某一植物提取液中的生长素含量时，可依上法求切段增长％，然后查标准曲线即可。 ? [ 思考题 ] 1. 芽鞘切断法整个操作过程，为什么在暗室中绿光下进行？ 2. 为什么要用缓冲液来配制 IAA 的系列标准溶液？