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尿路上皮癌细胞的捕获 1、背景 2、临床检验金标准 3、目前可通过尿液检测膀胱癌的方法 4、我们的目标 5、我的想法 6、调研结果 ;背景???? 膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤，在我国每年有约15万的膀胱癌新发病例，而且发病率呈逐年增高之势。由于全部尿路从肾盏、肾盂、输尿管、膀胱及前列腺和尿道均为移行上皮所覆盖，所以90 %以上是移行细胞癌(Transitional Cell Carcinoma, TCC)，少数为鳞癌和腺癌。移行细胞癌患者中近30％初诊时已有肌层浸润，其余70％为浅表性膀胱癌； ;2、临床检验金标准 膀胱镜下活检 通过外科手术将膀胱境插入到膀胱内部进行直接地观察，类似于胃境。; 尿细胞学检查 ;金标准的不足 虽然膀胱镜是诊断复发性尿路上皮癌的金标准，但是具有侵入性，且对于微小病变和原位癌不易辨认。尿脱落细胞病理学检查虽然无创伤，然而阳性率仅为8 %～46 %，尤其在检测低级别肿瘤时敏感度更低,而且结果判断具有主观性，容易产生偏差。另外，感染、结石等亦可影响细胞的形态而造成假阳性。;3、目前可通过尿液检测膀胱癌的方法;核基质蛋白22（NMP22）;免疫细胞学检测（ImmunoCyt）;纤维素/纤维蛋白原降解产物（FDP）;背景：荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization ,FISH)是用荧光标记的核酸探针和中期或间期细胞DNA杂交，检测DNA序列及其变化的方法。膀胱癌细胞易发生非随机的染色体改变，包括结构畸变和染色体数目异常。超过50 %膀胱癌患者有此染色体改变，被认为是肿瘤发生的早期事件和关键步骤； 缺点： FISH存在的问题有Ta、Tis期肿瘤相对敏感度较低。常因尿液肿瘤细胞不够而影响特异性。而且高昂的价格和繁琐的操作过程也影响了它的应用和推广。 敏感度85%，特异度97%;背景：大量研究显示,在TCC中存在总体上染色体的不稳定性,多条染色体多个区段发生LOH。研究证明只需做20个高信息含量位点就可以达到充足的信息量（敏感度95％以上）用以检测各种类型膀胱癌，而且不受肿瘤病理分级和分期的影响。 缺点：由于大量的LOH模式尚未清晰，还需要花费大量的时间和精力去研究，再加上MSI分析需要异常细胞含量占到10％以上，以及尿沉渣细胞无法满足的大量DNA，这些都限制了它的应用。;单核苷酸多态性检测;缺点： CpG岛是人类基因启动子富含CpG双核苷酸的区域,在正常状态下是未甲基化的,其甲基化状态与基因转录及表达活性有关,并因此影响基因的功能。 CpG岛的过甲基化几乎在每种类型的肿瘤中都有发生,并且涵盖了DNA修复、细胞周期、细胞凋亡、细胞黏附、细胞代谢等各个方面。很多研究人员使用不同的位点组合检测膀胱癌病理标本已经达到了90％以上的敏感度和特异度，受尿沉渣细胞量的限制，敏感度普遍稍低，虽然亦有100％的报道，但尚缺乏大样本研究证实。 缺点：需要亚硫酸盐处理过夜，步骤较多，费时较长，模板在处理之后变成小片段，影响扩增，泌尿系统其他肿瘤脱落细胞可能会混杂其中影响结果判断。;总结：上述方法整体上存在的问题 1、特异性和敏感性不足 2、受其他肿瘤细胞或炎症细胞的影响 3、受尿液中细胞的浓度的影响 如何解决？;4、我们的目标（没有蛀牙！）;简单思路： 1、通过抗原抗体特异结合从尿液中捕获肿瘤细胞 2、做免疫荧光杂交坚定所捕获的细胞是否为肿瘤细胞 可能存在的问题： 1、癌细胞在尿液中存活的时间较短 2、尿液恶劣的环境对特异性抗体的影响 3、尿液中背景较多，干扰实验 ;我的想法：;明显的优点 1、非尿液环境，背景和干扰小 2、特异性明显增加 3、后期如果进行微卫星或甲基化研究，将有非常高的敏感度。 可能存在的问题 1、细胞经不起折腾 2、捕获效率可能影响细胞的数量 3、无法排除其他肿瘤细胞的影响 ;调研结果 肿瘤细胞表面抗原 1、EGFR 2、HER2/c-erbB-2 3、VEGFR(VEGFR1 and VEGFR2) 4、Integrin αVβ3 5、Integrin α5β1 6、Carbonic anhydrase 9?(CAIX) 7、EpCAM 肿瘤胞内抗原（特异或过量） 1、CK7 2、CK20 3、 ImmunoCyt 4、 BLCA-4 ;既然已经想好了，那就翻滚吧！