DNA重组技术的基本工具(刘)概要.ppt

资料分析 基础理论和技术的发展催生了基因工程 DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物问世 PCR技术的发明 1.1 DNA重组技术的基本工具 DNA重组技术的基本工具 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性核酸内切酶 DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——基因进入受体细胞的载体 基因进入受体细胞的载体 　　 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是载体。 练习 在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 基因工程常用的受体细胞有（ ） (1)大肠杆菌 （2）枯草杆菌 （3）支原体 （4）动植物细胞 A. （3）（4） B. （1）（2）（4） C. （2）（3）（4） D. （1）（2）（3） * * * * * 位于费城托马斯·杰斐逊大学的希拉里和她的同事成功地将人体狂犬病抗体的DNA译码移入烟草作物中。  转基因烟草作物可以产生一种人体蛋白质，而这种物质能抗击致命性的狂犬病病毒。  基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。 基因工程 基因工程 操作意图： 操作场所： 操作技术： 操作结果： 操作水平： 指按照人们的愿望，进行严格的设计 在体外进行 DNA重组和转基因等技术 赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 在DNA分子水平上进行设计和施工的 基础理论 技术发明 工欲善其事, 必先利其器. 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 重组DNA 导入 形成 　 基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具： 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1.来源： 主要是从原核生物中分离纯化来的。 2.种类：约4000种。 3.作用： 能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数是由4、5或8个核苷酸组成。 两链之间的氢键无需限制酶的催化即可断裂，而磷酸二酯键的断裂必须依赖限制酶的作用 4.限制酶的切割方式： 例如： EcoRI限制酶：在中心轴线两侧将DNA切开，切口是黏性末端。黏性末端指的是双链DNA分子被限制酶切开后，切口处的两个伸出的、由若干个特定核苷酸组成的单链。 SmaI限制酶：沿着中心轴线切开DNA，切口是平末端。 G A A T T C C T T A A G 中轴线 C T T A A G A A T T C G 大肠杆菌的一种限制酶（EcoRI)能识别GAATTC序列，SmaI识别CCCGGG序列: C C C G G G G G G C C C C C C G G G G G G C C C 黏性末端 平末端 　　DNA连接酶的作用是：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 切断的DNA片段要与受体细胞的DNA连接，你觉得可以用什么酶？ DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？ “分子缝合针”———DNA连接酶 DNA聚合酶的作用是：以一条链为模板，催化单个游离的脱氧核糖核苷酸通过磷酸二酯键形成其互补链。 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否一样呢？ E.coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 但连接平末端之间的效率比较低 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，在细胞中能复制或整合到染色体DNA分子上，随染色体进行同步复制并带着插入的目的基因一起复制 质粒的