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绪论-细胞概述 细胞学说(Cell Theory)，所有的生物都是由一个或多个细胞组成的，细胞是生命的基本单位，一切细胞产自细胞。 原生质理论，有机体的组织单位是一小团protoplasm, 这种物质在一般有机体中是相似的 并把细胞明确地定义为:“细胞是具有细胞核(Nuclei)和细胞膜(Plasma membrane)的活物质” 细胞结构共性 选择透性的膜，遗传物质，核糖体 细胞功能共性 自我增殖和遗传物质复制，新陈代谢与酶学反应，运动性，应答与自我调节，复杂而有序，进化。 结构域 (domain)∶是指生物大分子中具有特异结构和独立功能的区域。 1 1 1 细胞生物学研究方法 镜像形成的三要素:照明系统，样品，透镜系统 显微镜 ◆相差显微镜（Ph2，标本密度不同导致光程差 振幅差 无色、透明、活细胞结构 ◆微分干涉显微镜 更强立体感 ，便于显微操作 ◆暗视野显微镜（丁达尔现象：光斜射到样品上） 物体轮廓，无微细结构 ◆荧光显微镜（紫外光源激发细胞内荧光标记染料） ◆激光共聚焦显微镜 激光扫描、分辨力提高、可立体三维重建 电子显微镜 ◆透射电子显微镜：细胞内部结构观察 ◆扫描电子显微镜：样品表面形貌特征观察 ◆扫描隧道显微镜 微观世界物质表面特征，但样品必须是导体 ◆原子力显微镜 微观世界物质表面特征，不要求导体，提供三维表面图，不需样品处理、常压及液体环境中工作；但分辨率低于扫描电镜 细胞组分的分析方法 细胞化学技术，细胞分选，细胞组分的分离 细胞化学技术 ◆酶细胞化学技术（酶与底物） 酶细胞化学技术就是通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的定位。 ◆免疫细胞化学技术（抗原抗体） 利用免疫反应定位组织或细胞中的抗原成分分布 ◆放射自显影技术 利用放射性同位素标记研究细胞内大分子的合成动态（分布、定位、排出、合成等） ◆其他：DNA、RNA染色 原位杂交技术 细胞分选 ◆流式细胞术 干涉检测器：发现细胞 荧光检测器：发现标记 ◆染色体分选 6， 细胞组分的分离 超速离心技术：分离细胞器与生物大分子及复合物 ◆ 速度离心： 差速离心、移动区带离心 ◆等密度离心：层析分离技术 层析分离技术：分离蛋白质 ◆ 凝胶过滤 ◆亲和层析 ◆离子交换层析 7，细胞工程技术 细胞培养 细胞融合与单克隆抗体 基因转染与敲除 转染 (transfection)：将具有生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能 8，组学研究技术 细胞质膜与跨膜运输 Common functions of plasma membrane 界膜和区室化;功能定位与组织化。参与细胞间的相互作用；信号检测与传递。能量转换；调节运输 红细胞血影 是将分离的红细胞放入低渗溶液中，水渗入到红细胞内部，红细胞膨胀、破裂，从而释放出血红蛋白，所得到的红细胞质膜具有很大的变形性、柔韧性和可塑性，当红细胞的内容物渗漏之后、质膜可以重新封闭起来称为红细胞血影。 膜脂：甘油磷酯，鞘脂，胆固醇 膜脂的特性：膜脂的基本性质是“amphipathic molecule”, 能够self assembling as 双层结构或自我封闭成球状，受到损伤时可以自动再封闭。 脂质体(Liposome) 可用作生物膜的研究模型，并可作为生物大分子与药物的运载体。 膜脂的功能 ◆构成膜的基本骨架,去除膜脂，则使膜解体; ◆是膜蛋白的溶剂，一些蛋白通过疏水端同膜脂作用，使蛋白镶嵌在膜上，得以执行特殊的功能; ◆膜脂为某些膜蛋白(酶)维持构象、表现活性提供环境, 一般膜脂本身不参与反应(细菌的膜脂参与反应); ◆膜上有很多酶的活性依赖于膜脂的存在。有些膜蛋白只有在特异的磷脂头部基团存在时才有功能。 4， 膜糖 ◆存在方式：glycoprotein (93%)；glycolipid (7%) ◆膜糖功能 保护作用 细胞与环境的相互作用 糖脂 糖脂普遍存在于原核和真核细胞膜上,含量约占膜 脂的5%以下; 最简单的糖脂是半乳糖脑苷脂,它仅有一个半乳糖作为极性头部; 变化最多、最复杂的是神经节苷脂,它是神经原质膜具特征性的成分; 保护细胞膜、信号识别。 膜蛋白 ◆存在方式： 整合蛋白：跨膜蛋白，部分或全部镶嵌在膜中 外周蛋白：外露在膜的外侧或内侧，非共价键 脂锚定蛋白：共价键方式与脂分子连接 ◆膜蛋白功能 运输，代谢，连接，信号转导 去垢剂可以破坏脂双层溶解膜蛋白 利用温和去垢剂溶解、纯化和重建功能膜蛋白的系统 膜的分子结构及特点 ◆流动镶嵌模型 (Fluid mosaic model) 膜上脂质分子排成双层构成生物膜的骨架，蛋白质分子以不同方式镶嵌或联结于脂双层上；膜的两侧结构是不对称的，