Cu2+,Hg2+,Cr2+对豌豆根尖细胞的微核效应.docVIP

Cu2+，Hg2+，Cr2+对豌豆根尖细胞的微核效应 摘要：以豌豆根尖为供试材料,以不同浓度的Cu2+，Hg2+，Cr2+为受检物质, 采用实验分析与 统计分析的方法，探讨Cu2+，Hg2+，Cr2+对豌豆根尖细胞的微核效应。结果表明 Cu2+，Hg2+， Cr2+在一定浓度范围内，均能诱发豌豆根尖细胞产生一定的微核率，但不同的重金属离子，对 豌豆根尖细胞的所起的微核效应则不同。 关键词：Cu2+，Hg2+，Cr2+，豌豆，根尖细胞，微核率 微核是指位于细胞浆中独立于主核的核小体 ,染色同主核 ,其直径一般为主核的 1 /3～1 /2, 主要由外界损害因素 (生物、 物理、 化学 )作用细胞后 , 导致细胞染色体丢失或断裂 , 从而在胞浆中形成 1个或数个小核。多种实验已经证实 ,微核率的大小和作用因子的剂量有一定的关系[1]。故常用微核来检测各种理化因子对生物体潜在的遗传危害。 如今环境重金属污染已引起广泛关注。植物对重金属的吸收、 积累及重金属对植物的生理生化特性的影响已有较多报道 ,而其对染色体行为的影响少见报道。蚕豆根尖细胞在分裂期间对外界环境反应敏感 ,造成染色体畸变、 微核等分裂异常现象。因此，本实验通过计算蚕豆根尖细胞分裂后微核的数量,来监测重金属Cu2+，Hg2+，Cr2+对环境的污染程度,即验证微核测定技术及其作为一种环境致突变性的检测手段的广泛应用性。 材料与方法 1.1材料 豌豆若干 1.2试剂 卡诺氏固定液、70%乙醇、改良品红、浓度为0.025，0.05，0.1mg/mL的Cu2+、浓度为0.025，0.05，0.1mg/mL的Hg2+，浓度为0.025，0.05，0.1mg/mL的Cr2+ 1.3方法与步骤 材料准备 取豌豆种子，置于铺好含充足水分的纱布的培养皿中,在 25℃的人工气候箱中培养2-3d。在此过程中要不断加水,保证种子生长所需水分。 染毒处理 待豌豆根长出后,选取长势较好的种子进行实验。每组选择两粒种子,吸干根部表面水分,用配置好的溶液浸泡其根部,进行染毒处理24h。 材料固定 取培养结束的豌豆根尖0.5-1cm移入卡诺氏固定液中，4℃条件下固定24h。用70%乙醇冲洗2次后转入70%乙醇中置4℃冰箱中保存待用。 材料解离 将从70%乙醇中取出的根尖材料用蒸馏水漂洗后置入60℃恒温水浴锅中预热的1mol/LHCl中，解离8-10min；然后用蒸馏水冲洗2-3次。 制片 将解离后的根尖材料用蒸馏水漂洗2-3次，置于载玻片上从根冠起切取根尖2-3mm,然后用改良品红溶液染色20min，盖上盖玻片,用手指轻压使染色区呈云雾状。 镜检 在显微镜下观察,凡小于主核1/3以下,同主核有相同染色效果的圆形、椭圆形或不规则形状的染色物质都可以算作微核。 结果与分析 2.1重金属离子具有诱变活性 蒸馏水培养的豌豆作为空白对照，结果如表1，其微核率明显低于重金属离子处理的，说明重金属Cu2+，Hg2+，Cr2+具有诱变活性,能诱发豌豆根尖细胞微核率的提高。 表1 不同溶液诱发的蚕豆根尖徽核率 溶液mg/mL 微核数/个 观察细胞总数/个 微核率/‰ 蒸馏水 0，0，0，0，0 941 0 Cu2+ 0.1mg/mL 0.05 mg/mL 0.025 mg/mL 3，2，4，5，3 2，1，0，3，2 0，1，0，0，2 958 877 923 17.75 9.12 3.25 Hg2+ 0.1mg/mL 0.05 mg/mL 0.025 mg/mL 3，2，5，5，3 1，3，2，3，5 1，2，0，1，2 934 846 934 19.27 16.55 6.42 Cr2+ 0.1 mg/mL 0.05 mg/mL 0.025 mg/mL 4，2，5，3，2 2，3，1，2，2 1，0，2，0，3 916 892 860 17.47 11.21 6.98 2.2 同一种重属离子，不同浓度对豌豆根尖细胞微核率的影响不同 图1 不同浓度Cu2+诱发的根尖徽核率 图2 不同浓度Hg2+诱发的根尖徽核率 图3 不同浓度Cr2+诱发的根尖徽核率 从图1可以看出，Cu2+对豌豆根尖徽核率Cu2+的浓度呈正相关关系。当用低浓度的Cu2+处理豌豆根尖，其微核率较低，而随着Cu2+浓度的增加，豌豆根尖细胞的微核率逐渐上升。这说明在同样的处理时间下,在一定浓度范围内，低浓度Cu2+溶液对豌豆根尖伤害不明显；高浓度的,溶液会引起豌豆根尖细胞微核产生敏感性变化。 从图2、图3也同样可以分别得出低浓度对豌豆根尖伤害不明显，高浓度则作用显著。 2.3 同一浓度，不同重金属离子对