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第十一章 色谱法基础 Chromatography 概述 色谱法又称色层法或层析法。 *色谱法是一种物质的分离方法。在1903年，俄植物学家Michail Tswett在研究植物色素的成分时，在一根玻璃管中填上碳酸钙颗粒，然后把植物叶的石油醚提取液加在柱中，这时色素便被碳酸钙柱吸附在柱的顶端上。 *然后继续加入石油醚，使其自由流下，这时植物色素在碳酸钙柱内下移，并逐渐分离成不同颜色的色带。*这种分离植物色素的方法即被称为色谱法。 层析法(色谱法) 分离物质的方法之一:离心 分离物质的方法之一:过滤 蒸馏 分馏 萃取 *这支填有碳酸钙（填充剂）的玻璃管被称为色谱柱。 *玻璃管内的填充物（如CaCO4颗粒）即称为固定相。 *流经固定相的孔隙或表面的溶剂（如上述提到的石油醚）称流动相。 色谱柱：Chromatographic column HPLC column GC Capillary column 固定相：Stationary phase 流动相：Mobile phase *现代，关于色谱法、固定相和流动相以及色谱本身的概念已有了很大的发展。 *其它的分离方法：蒸馏，升华，结晶，溶剂萃取，化学沉淀法等等。 *与以上这些方法相比，色谱法的分离效果更好，效率更高。很多物理、化学性质很相近的化合物都可以采用色谱法进行分离、分析与测定。目前，可以说几乎在所有领域都有色谱分析法的应用。 色谱分析方法的分类 在色谱分析法中，流动相可以是气体或液化，而固定相一般为固体或液体。 流动相——液体或气体 固定相——固体或液体 *当固定相和流动相是两种互不相溶的液体时，这种分离方法就叫液--液色谱法。 *如果固定相是固体，而流动相是液体，则称为液--固（或吸附）色谱法。 *还可按固定相的使用形式分类： A、柱层析 B、纸层析 C、薄层层析 薄层层析法 色谱分离过程的原理 色谱分离过程是利用试样中各组分在固定相等流动相之间具有不同的分配常数，即具有不同的溶解和解析能力，或不同的吸附、脱附能力，或其它亲和性能的差异。 *如：在柱层析过程中： 假设：一个含有三种化合物的试样由流动相带入色谱柱中，并朝着流动相的方向往前移动。由于各组分在固定相中的分配系数可吸附和脱附能力有差异，各组分在色谱柱中的移动速度不同。当移动一定的柱长之后，各组分即可得到完整的分离。 色谱分离过程 色谱图（Chromatogram） 试样中各组分经色谱柱分离后，随流动相依次流出色谱柱进入检测器，检测器的响应信号随时间变化曲线或检测器的响应信号一流动相体积曲线，称为色谱图。 *基线baseline —— 如果没有进样，只有流动相在流动，得到的检测信号应是一条平稳的平行于横坐标的直线，这条直线称为基线。 *色谱峰（Peak）—— 当试样中的组分经色谱柱分离之后进入检测器时，得到的响应信号的大小随时间变化所形成的峰形曲线称为色谱峰（Chromatographic peak）。 色谱图 *正常的色谱峰为对称于峰尖的正态分布曲线。 *峰底——峰的起点与终点连接线称为峰底。 *峰高与峰面积——色谱峰顶点与峰底之间的垂直距离称为峰高（Peak Height）。 （Peak Area）峰与峰底之间的面积称为峰面积。 *半高峰宽（peak width at half height）——即色谱峰高一半处的峰宽，称为半高峰宽。 *峰宽——自色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交于两点，此两点间的距离称为峰宽（Peak width）。 W = 1.7 W h/2*保留时间——从进样开始到柱后被测组分出现浓度最大值时所需的时间称为保留时间（Retention time ），用tR表示。 *保留体积——从进样开始到柱后被测组分出现浓度最大值时流动相所通过的体积称为保留体积。VR表示。（Retention Volume） *死体积——不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需流动相的体积称为死体积（Dead Volume），用VM表示。所对应的保留时间称为死时间。 VM = Tm × Fc （Fc 体积流量） *调整保留时间——扣除死时间后的保留时间称为调整保留时间（Adjust Retention Time） 用t R’ 表示： t R’ = t R – t M *调整保留体积——扣除死体积后的保留体积称为调整保留体积，用V ’R表示。 V ’R = V R – V M *相对