全稿-岱衢族大黄鱼线粒体基因组全序列的扩增及特异鉴别引物的开发.docVIP

岱衢族大黄鱼线粒体基因组全序列的扩增及其特异鉴别引物的开发 摘要：本研究使用15对引物PCR扩增、克隆获得了岱衢族和闽-粤东族大黄鱼线粒体基因全长序列，结合NCBI上的已知序列FJ 595214和NC011710分析出大黄鱼线粒体基因的高变异区域；通过2对引物扩增了岱衢族和闽-粤东族样本各25条的高变区域，对测序结果分析处理分成3个不同的分类单元（Operational Taxonomic Unit，OTU）：D1-N1、D1-N2和D2；岱衢族大黄鱼25个样品均为D1-N1型；而闽-粤东族大黄鱼中可以分为3个类型：D1-N1型，4个样品，D1-N2型，5个样品，D2型，16个样品；然后设计出能有效区分不同OTU分型的特异鉴别引物J1和J2，并对PCR鉴别的条件进行了优化，退火温度和循环数优选55.8℃、28；使用鉴别引物进行PCR反应电泳拍照后，如果样品分型为D1-N2型和D2型，则100%为闽-粤东族大黄鱼，如果样品OTU分型为D1-N1，则该样品为岱衢族大黄鱼的概率为86.2%，闽-粤东族大黄鱼的概率为13.8%，在此研究基础上，可再结合其它的差异区域分型来更进一步提高岱衢族大黄鱼鉴别的准确率。研究结果为岱衢族大黄鱼的种质资源保护、良种选育和市场销售等方面提供技术支持。 关键词：；岱衢族大黄鱼；闽-粤东族大黄鱼；线粒体基因组；OTU; 鉴别 The amplifi