第十章.遗传重组.技术报告.ppt

* 第十章 遗传重组 前面讲的主要是遗传物质的纵向流动, 垂直传递。 遗传物质的特性 遗传物质的复制 遗传物质的修复 遗传物质的转录及转录后加工 遗传物质的翻译及翻译后加工 纵向流动，垂直传递 现在我们要讲的主要是遗传物质的横向流动，水平传递。 遗传物质的交换，基因的交换就是遗传重组 （Genetic recombination). 遗传重组主要包括： 同源重组（Homologous recombination ） 位点专一重组（Site-specific recombination） 转座作用（Transposition） 9，1 同源重组 1，同源重组的概念 同源重组：发生在任何DNA的同源序列之间的 遗传重组。 真核微生物非姊妹染色体的交换，姊妹染色体的交换， 微生物的转化，转导，接合等等，都属于同源重组。 只要两条DNA序列相同，或接近相同，就可以在序列 的任何一点发生同源重组。无序列的特异性。 虽无序列的特异性，但也存在重组热点，即在同源序列 内有些位点发生重组的几率大于其它位点。该重组热点 也称为Chi(念“吃”)位点（ 保守序列为：GCTGGTGG ）。 正在多处 进行交换的 姊妹染色体。 染色单体 同源 配对 进行 交换 交换后 分离 已经不是原来的染色体。 2，同源重组的分子机制 进行交换后的姊妹染色体已经不是原来的染色体。实质上，是染色体中的DNA发生了断裂，发生了复合。我们用Holliday model解释同源重组的分子机制。 Holliday 中间体 1）Holliday 中间体的形成 在临近Chi位点处由核酸酶产生一个切口，RecA结合上去，形成RecA-ssDNA复合体。 RecA-ssDNA复合体各伸向对方。 封闭缺口，Holliday 中间体的形成，交叉点沿DNA移动。 在临近Chi位点处由核酸酶产生一个切口, ssDNA复合体各伸向对方. 封闭缺口，Holliday 中间体的形成. 2）Holliday 中间体的拆分 Holliday 中间体 异构化 异构化 旋转 不是一个点，而 是两条分开的线 横向 切开 纵向 切开 亲本链 （parental） 重组链 （ recombinant ） 通过Holliday 中间体的形成 与拆分实现了遗传物质的重组 9，2 位点特异性重组 E.coli 染色体 λ噬菌体 整合 分离 E.coli 染色体 λ噬菌体 BOB’ POP’ BOP’ POB’ + + λ噬菌体的 整合与分离 就是典型的 位点特异性 重组。 重组发生在 特异的位点。 E.coli 染色体与λ噬菌体发生了重组。 9，3 细菌中的转座成分 转座 细菌中的DNA片段进行复制然后转移到基因组其它位置的过程。 细菌中的 转座成分 插入序列（insertion sequence, IS） 复合转座子（composite transposons） Tn A 转座子家族（ Tn A family） 可转移噬菌体（ transposable phages） 9.3.1 插入序列 P430 表11-2 列出了细菌中常见的IS 1, 结构特征 总长700-1500bp 反向重复 （15-25 bp） 反向重复 （15-25 bp） 中间是编码序列，编码蛋白质 2-4个，与转座有关，比如， 转座酶。 2, 靶点的特征 靶点：插入序列所插入的位点 1） 靶点的长度一般为5-9bp; 2） 靶点的选择原则上是随机的，但也有一定的倾向； 3）当IS插入到靶点时，靶点序列往往出现倍生，以同向重复 的形式出现。 ATGCA TACGT ATGCA TACGT ATGCA TACGT IS插入到靶点 9.3.2 复合转座子 1, 复合转座子（Tn）的基本特性 1）转座子序列长； 2）除含有转座酶基因外，还含有抗药性基因； 3）末端组件本身是插入序列，或类插入序列； 插入序列：既存在于复合转座子中，也独立的存在。 类插入序列：只存在于复合转座子中，不独立的存在。 4）两个末端组件的序列是相同或不相同，方向是相同或 倒转，活性是相同或有强弱之分。 末端组件 末端组件 IS或类IS IS或类IS 2, Tn10 Tn10插入在靶序列中： 靶序列 靶序列 末端组件 末端组件 IS10L IS10R Tn10 两个末端组件为类插入序列。 两个末端组件的序列有少数差异。 两个末端组件的序列为倒转。 转座活性主要依赖IS10R，IS10L活性很低。 靶序列 靶序列 末端组件 末端组件 IS10L IS10R Tn10 靶序列 P- out P-in outRNA inRNA IS10R有两个 启