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第十章.遗传重组.技术报告.ppt

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* 第十章 遗传重组 前面讲的主要是遗传物质的纵向流动, 垂直传递。 遗传物质的特性 遗传物质的复制 遗传物质的修复 遗传物质的转录及转录后加工 遗传物质的翻译及翻译后加工 纵向流动,垂直传递 现在我们要讲的主要是遗传物质的横向流动,水平传递。 遗传物质的交换,基因的交换就是遗传重组 (Genetic recombination). 遗传重组主要包括: 同源重组(Homologous recombination ) 位点专一重组(Site-specific recombination) 转座作用(Transposition) 9,1 同源重组 1,同源重组的概念 同源重组:发生在任何DNA的同源序列之间的 遗传重组。 真核微生物非姊妹染色体的交换,姊妹染色体的交换, 微生物的转化,转导,接合等等,都属于同源重组。 只要两条DNA序列相同,或接近相同,就可以在序列 的任何一点发生同源重组。无序列的特异性。 虽无序列的特异性,但也存在重组热点,即在同源序列 内有些位点发生重组的几率大于其它位点。该重组热点 也称为Chi(念“吃”)位点( 保守序列为:GCTGGTGG )。 正在多处 进行交换的 姊妹染色体。 染色单体 同源 配对 进行 交换 交换后 分离 已经不是原来的染色体。 2,同源重组的分子机制 进行交换后的姊妹染色体已经不是原来的染色体。实质上,是染色体中的DNA发生了断裂,发生了复合。我们用Holliday model解释同源重组的分子机制。 Holliday 中间体 1)Holliday 中间体的形成 在临近Chi位点处由核酸酶产生一个切口,RecA结合上去,形成RecA-ssDNA复合体。 RecA-ssDNA复合体各伸向对方。 封闭缺口,Holliday 中间体的形成,交叉点沿DNA移动。 在临近Chi位点处由核酸酶产生一个切口, ssDNA复合体各伸向对方. 封闭缺口,Holliday 中间体的形成. 2)Holliday 中间体的拆分 Holliday 中间体 异构化 异构化 旋转 不是一个点,而 是两条分开的线 横向 切开 纵向 切开 亲本链 (parental) 重组链 ( recombinant ) 通过Holliday 中间体的形成 与拆分实现了遗传物质的重组 9,2 位点特异性重组 E.coli 染色体 λ噬菌体 整合 分离 E.coli 染色体 λ噬菌体 BOB’ POP’ BOP’ POB’ + + λ噬菌体的 整合与分离 就是典型的 位点特异性 重组。 重组发生在 特异的位点。 E.coli 染色体与λ噬菌体发生了重组。 9,3 细菌中的转座成分 转座 细菌中的DNA片段进行复制然后转移到基因组其它位置的过程。 细菌中的 转座成分 插入序列(insertion sequence, IS) 复合转座子(composite transposons) Tn A 转座子家族( Tn A family) 可转移噬菌体( transposable phages) 9.3.1 插入序列 P430 表11-2 列出了细菌中常见的IS 1, 结构特征 总长700-1500bp 反向重复 (15-25 bp) 反向重复 (15-25 bp) 中间是编码序列,编码蛋白质 2-4个,与转座有关,比如, 转座酶。 2, 靶点的特征 靶点:插入序列所插入的位点 1) 靶点的长度一般为5-9bp; 2) 靶点的选择原则上是随机的,但也有一定的倾向; 3)当IS插入到靶点时,靶点序列往往出现倍生,以同向重复 的形式出现。 ATGCA TACGT ATGCA TACGT ATGCA TACGT IS插入到靶点 9.3.2 复合转座子 1, 复合转座子(Tn)的基本特性 1)转座子序列长; 2)除含有转座酶基因外,还含有抗药性基因; 3)末端组件本身是插入序列,或类插入序列; 插入序列:既存在于复合转座子中,也独立的存在。 类插入序列:只存在于复合转座子中,不独立的存在。 4)两个末端组件的序列是相同或不相同,方向是相同或 倒转,活性是相同或有强弱之分。 末端组件 末端组件 IS或类IS IS或类IS 2, Tn10 Tn10插入在靶序列中: 靶序列 靶序列 末端组件 末端组件 IS10L IS10R Tn10 两个末端组件为类插入序列。 两个末端组件的序列有少数差异。 两个末端组件的序列为倒转。 转座活性主要依赖IS10R,IS10L活性很低。 靶序列 靶序列 末端组件 末端组件 IS10L IS10R Tn10 靶序列 P- out P-in outRNA inRNA IS10R有两个 启

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