cre_loxp基因敲除系统重点分析.pptVIP

基因敲除 Knock Out 背景介绍 同源重组Homologus Recombination 同源重组是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。在基因敲除小鼠制作过程中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的重组载体，将重组载体导入到胚胎干细胞后外源的重组载体与胚胎干细胞中相同的片段会发生同源重组 一、Cre/Loxp系统 Cre重组酶（37℃） 位点特异性重组酶，介导loxp 位点间的序列同源重组 70%重组率，无需辅助因子，多种 结构的DNA底物 Loxp site 34bp反向重复序列 Flp/Frt重组系统 （1）重组方式 （2）基因敲除机理 基因敲除机理 （续） 二、基因敲除的基本流程 （1）打靶载体构建 （2）转化ES细胞 （3）阳性克隆筛选 （4）囊胚注射 （5）嵌合体小鼠 （6）品系纯化 三、Cre工具鼠的构建 诱导性组织特异性Cre工具鼠的载体构建 MerCreMer融合蛋白 该系统将雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)的配体结合区(ligand-binding domain,LBD)和Cre重组酶进行融合，产生一种嵌合重组酶，该嵌合重组酶的表达被置于特异启动子的调节之