海洋藻类活性物质的提取演示文稿.pptVIP

海洋沉积物中磷分级提取生物可利用磷估算 实验八 一、目的要求 掌握海洋沉积物中磷分级提取方法 掌握海洋沉积物中生物可利用磷估算 二、方法概述 分离、定量海洋沉积物中各种形态磷→化学试剂提取法。 基于给定提取剂对某一结合形式磷选择性的操作性定义 方法要求：磷含量＞0.005%，精密度4%。 二、方法概述 用MgCl2、NaOH和HCl三步提取，估算沉积物中磷生物可利用性。 第一步MgCl2提取：①悬浮物中浮游植物细胞内磷；②吸附于悬浮颗粒物中水合氧化物表面的磷。（NAIP） 第二步NaOH提取：①颗粒物中被Fe、Al水合氧化物吸附磷；②铁铝磷酸盐（Fe-P、Al-P）。（NAIP） 第三步HCl提取：磷灰石磷（生物难利用） 三、实验内容 （平行3份，空白1份） 称约40mg沉积物→50mL具塞比色管→40mL H2O→5mL5% K2S2O8+0.83mL 6mol/L H2SO4→盖塞→保鲜袋包扎瓶口→高压消化0.5h（105℃）→冷却室温→定容50mL→加混合试剂5mL→5cm比色皿880nm波长→测定吸光值 注意：比色前静置5分钟，比色时以防沉淀物上浮影响吸光值，可用吸管移取溶液 ①MgCl2提取相： 振荡2h离心（4500r/m）后→上清液15mL→定容50mL→与工作曲线步骤同。 所有提取步骤的残渣处理： 20ml蒸馏水分次洗涤三角瓶后→离心管→搅动→离心→弃上清夜→下一步提取液分次转移→原三角瓶 ② NaoH提取相： 振荡8h离心后→上清液15mL→酚酞1d→1mol/LHCl 几d pH＝7→定容至50mL→与工作曲线步骤同。 ③HCl提取相： 振荡1h离心后→5mL→10mol/LNaOH 约0.8mL调pH＝7→定容50mL→与工作曲线步骤同。 3. 钼蓝法测定磷 ① 磷标准使用溶液： 移取浓度为8.000μmol/mL的贮备液1.00毫升，稀释成100毫升，使含磷为0.0800μmol/mL。有效期为一周。 3. 钼蓝法测定磷 ② 混合试剂配制： 按序量取100mL 6 mol/l硫酸、40mL 3％钼酸铵溶液、40mL 5.4％抗坏血酸溶液和20mL0.136％酒石酸氧锑钾溶液于烧杯中，每加一种溶液均要混匀，盛于试剂瓶中。 有效时间为6小时，临使用前适量配制。 3. 钼蓝法测定磷 ③ 磷标准工作曲线制作 移取磷标准使用液0、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50mL于50mL比色管中。 用蒸馏水稀释到刻度，加入混合试剂5mL，混匀。 10min后以蒸馏水为参比 ，测吸光值。（如溶液温度小于15℃时需放置20min）  ① 2人一组 ② 每组做一个站位（北部湾沉积物样品） ③ 每个站位 总磷平行测定3份（空白1份） 磷分级提取平行测定3份（空白1份） 2、数据处理 * 二、方法概述 TP = IP+OP 潜在的生物可利用颗粒磷，在一定条件能进入水体被生物利用 高压锅在406：注意熟悉使用高压锅 1.总磷测定 注意熟悉使用振荡器和离心机 振荡器：506 离心机：507 三、实验内容 2、分级提取 平行 3份空白 1份 三、实验内容 2、分级提取 2、分级提取 三、实验内容 三、实验内容 三、实验内容 三、实验内容 四、数据处理 1、实验要求 四、数据处理 ① 计算样品总磷含量（mg/Kg） ② 计算样品各提取相磷的含量（mg/Kg） ③ 估算样品中生物可利用磷的含量（mg/Kg） 要求写出计算过程和填写表1。 * * 以C-O-P键结合的磷 以C-P键结合的磷 指磷酸钙等天然碎屑成因的无机磷 指除了AIP外，所有其它无机磷，主要包括颗粒表面松散吸附的无机磷，吸附在水合氧化物表面的无机磷，以及磷酸铁铝，磷铝石等矿物态磷 TP IP OP * * 磷灰石磷（AIP）：Ca-P 无机磷（PI） P总 有机磷（PO） 非磷灰石磷（NAIP）：(Fe + Al)-P * * 颗粒物样品50mg 上清液15ml定容至50ml测定MgCl2－P 上清液15ml定容至50ml测定NaOH－P 上清液5ml定容至50ml测定HCl－P 0.1mol/LNaOH20ml 振荡8h 离心 1.0 mol/LHCl 20ml 振荡1h 离心 1.0 mol/LMgCl2 20ml 振荡2h 离心 残渣 残渣 残渣 弃去 *