第五讲酶化学解析.ppt

第四讲 酶化学 ⒉高度专一性 即一种酶只作用于一种底物或一类底物 ⑴绝对专一性 只作用于一种底物 ⒊作用条件温和 一般在常温下进行, 例如水解淀粉：若用酸水解,需要245～294kPa压力和140～150℃的高温及耐酸设备; 而用淀粉酶水解,则仅需在65℃,一般设备即可。 二、酶的命名 包括习惯命名及系统命名 ⒈习惯命名 根据酶作用的底物、或酶的来源等来命名 例如淀粉酶或霉菌淀粉酶或高温淀粉酶或碱性蛋白酶 习惯命名简单、易懂、应用历史长，但缺乏系统性，不容易区别。 ⒊酶催化的反应⑴氧化还原酶类（E.C.1） 该类酶催化下列反应 不仅包括脱氢酶、氧化酶，还包括过氧化物酶、加氢酶等 ⑵转移酶类E.C.2 ⑶水解酶类E.C.3 ⑸异构酶类E.C.5 催化各种同分异构体的相互转变 三、酶的辅助因子仅由蛋白质组成的酶，称为简单酶；由蛋白质及非蛋白小分子组成的酶，称结合酶；结合酶中的蛋白部分称酶蛋白，非蛋白小分子称辅助因子，它又分为辅酶或和辅基。与酶蛋白松散结合，可用透析法除去的小分子叫辅酶，如丙酮酸脱氢酶中的NAD+。与酶蛋白紧密结合（共价、离子键等），不能用透析法除去的小分子物质叫辅基，如羧肽酶中的锌。 四、酶的活性部位（活性中心） 溶菌酶活性中心图 五、酶的作用机制 ⒈酶催化与活化能 催化过氧化氢分解 加热使过氧化氢分解，活化能为75348焦耳/摩尔 以胶态钯为催化剂，活化能降低至48976焦耳/摩尔； 过氧化氢酶催化，活化能降低至8372焦耳/摩尔。 过氧化氢酶的作用，使活化能降低至无催化剂时的11%，其反应速度增加1亿倍以上。 ⒉中间产物学说 当酶与底物相遇时，首先形成不稳定的酶—底物复合物，底物分子处于活化状态，即反应活化能降低；然后复合物分解，生成产物；酶脱落，再与底物结合。 E + S = ES P + E 光谱法已经找到一些中间产物的证据。 如过氧化物酶—H2O2复合物；过氧化物酶为铁卟啉蛋白，有特征吸收光谱。 加H2O2前4个吸收峰（645、 583、 548、 498） 加入H2O2后，吸收光谱发生明显改变，变为两个吸收峰（561、 530.5） 再加入供氢体抗坏血酸等，体系光谱又发生变化，重新出现在645、 583、 548、 498的吸收峰。 ⒊诱导契合学说 1958年，由Koshland提出，要点是： 酶活性中心的结构有柔性，与底物结合时，受到底物的诱导，酶构象相应发生改变，从而引起活性部位有关基团空间位置的变化，以便与底物的敏感键正确的契合，形成酶-底物中间复合物。 近年来用X-射线，核磁共振，差示光谱等手段证明了这种中间产物的存在。 如醇脱氢酶（ADH）的底物NADH在游离状态下，在340nm有一吸收峰，加入酶后吸收峰移至328nm，再加入巯基试剂对氯汞苯甲酸，又使吸收峰回到340nm。 电子显微镜下也观察到羧肽酶A的某些残基和底物甘氨酰—酪氨酸结合；以及溶菌酶的最小六糖底物躺在酶分子表面狭长凹穴中的证据。 4、过渡态互补学说 过渡态理论认为：酶与底物的过渡态互补，亲和力最强，释放出的结合能使ES复合物的反应能级降低，有利于底物分子跨越能垒，加速酶促反应，实际上这是诱导契合学说的不同版本。 实验结果指出，分子内咪唑基参与的酯解反应速度比相应的分子间反应速度大 24 倍。说明咪唑基与酯基的相对位置对水解反应速度具有很大的影响。 5、抗体酶 指同时具有抗体及催化功能的蛋白质 制备方法是： 半抗原（底物类似物）+蛋白质 结合抗原 动物免疫 单克隆抗体 ⒍酶催化机制 ⑴酶与底物的邻近定向 酶催化底物反应，首先要两者相互接近并形成过渡态中间复合物。 生理条件下，细胞中底物浓度多在0.001mol/L左右。但是，在酶活性部位测到的底物浓度则可达到100mol/L。 在活性中心，往往有少量水，当底物到达此部位，即达到高浓度。 试验表明，酶与底物形成专一复合物时，酶分子与底物分子的构象均改变，使酶分子的结合基团及催化基团分别与底物敏感键正确排列与定位，这就是邻近定向。 例如碳酸酐酶： CO2 + H2O HCO3- + H+ 该酶由260个氨基酸残基组成，为单肽链酶，活性部位含Zn2+，Zn2+与活性中心的三个组氨酸残基(94、96、119)侧链的氮原子配位，第四个配位体是水或羟基。 ⑵张力和形变 X-衍射分析证明：酶和底物结合时，底物分子向酶的活性部位靠近，诱导酶的构象发生变化，特别是活性部位的变化并与之结合；同时，酶也诱导底物分子的敏感键变形，由基态变成易变化的过渡态，从而加速反应进行。 例如羧肽