以选择性培养基分离和计数土壤微生物.docVIP

以選擇性培養基分離及計數土壤微生物 ? 原理：? 目前尚無一種培養基可以養出所有的微生物，但我們可以設計一種培養基，其組成份適合所要分離的微生物，而不利其他微生物的生長，如此一來，即使我們想分離的微生物為數不多，也可以將它們分離出來，這就是選擇性培養基。本實驗就是使用選擇性培養基來分離土壤微生物，並計數它們的數量以及觀察在不同的選擇性培養基下，菌落型態的差異。 ? 材料：分離細菌之培養基：TSA（Tryptic Soy Agar）、1/10 TSA 並分別添加100 ppm cycloheximide；分離放線菌之培養基：Alkaline Water Agar、Starch-Casein Agar並分別添加100 ppm cycloheximide；分離真菌之培養基：PDA（Potato Dextrose Agar）添加Triton X-100 (1 mg per mL)及100 ppm streptomycin sulfate、MRB（Martin’s Rose Bengal）再加入30 ppm streptomycin sulfate； (cycloheximide為抑制真核細胞蛋白質合成之抗生素，請小心使用)、9毫升0.85%生理食鹽水、玻璃彎棒、酒精燈、少許農地表土。 ? 步驟： 1. 配製選擇性培養基。 2. 秤過篩農土 1克置入9毫升生理食鹽水中，充分震盪混合，接著作10倍連續稀釋至適當的稀釋度。 3. 取0.1毫升稀釋液塗抹於不同的選擇性培養基平板上。分離細菌取104、105及106倍稀釋之稀釋液；分離放線菌取103、104及105倍稀釋之稀釋液；分離真菌則取102、103及104倍稀釋之稀釋液。 4. 塗抹過稀釋液之平板置於28℃培養箱中培養，按時觀察並記錄菌數、菌落型態、真菌孢子的顏色等。 5. 另外，秤10克濕土置入玻璃燒杯中，於105℃下烘乾至恆重，將燒杯連烘乾後的土放入乾燥器中，冷卻至室溫後秤重，即可知每克濕土的乾重。將平板上的菌數除以乾重，就可以知道每克乾重土壤的菌數。 6. 以t-test 做統計比較，細菌在相同養分但不同濃度下(TSA、1/10TSA)的數目有無差異；另外由分離放線菌的平板，純化 5個菌落型態不同之菌株，同時保留由真菌平板上所篩得的綠黴菌（Trichoderma spp.），作為下次實驗的材料。