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第四步，在DNA聚合酶作用下合成正链，合成自DR1处开始，再经过跳跃转位至DR2，这一过程称为“引物易位”。 9.4 人禽流感的分子机制 人禽流感是人类感染AIV后引起的以呼吸道症状为主的临床综合征。禽流感病毒粒子呈球形，基因组为多个负链RNA片段组成 流感病毒启动转录时，病毒内切核酸酶将宿主细胞mRNA5’端帽子结构切下作为病毒RNA聚合酶的引物，转录产生6个单顺反子的mRNA，并翻译成3种聚合酶。 禽流感病毒感染人类的机制 病毒基因组分为多个片段，极易发生基因的交换、重组并发生变异 HA受体结合位点的突变导致禽流感病毒易于感染人了细胞 PB2蛋白（复制酶）第627位氨基酸的点突变（谷氨酸变为赖氨酸）导致人禽流感病毒复制能力增强 NS1（非结构蛋白）第92位氨基酸的突变导致人禽流感病毒致病力增强 9.5 SARS的分子机制 冠状病毒是最大的RNA病毒，基因组为单链正链RNA，全长27～30kb，其5’端有甲基化帽状结构，3’端有不少于50个的polyA，与真核生物mRNA非常相似。 生活周期包括病毒侵染、复制和组装及分泌几个阶段。 病毒遗传物质以内吞方式进入靶细胞，基因组被释放到细胞质基质中，转录和复制在细胞质基质中进行。 翻译出以RNA为模板的RNA聚合酶 以基因组RNA为模板合成负链RNA 以负链转录生成新的病毒基因组，同时产生不同的mRNA，大部分为多顺反子。 9.6 基因治疗 人类疾病的发生，是人体细胞中自身基因的改变或由外源病原体的基因产物与人体基因相互作用的结果。因此，长期以来，科学家设想人类能否最终运用遗传物质，无论是人类自身的或是外源遗传物质来治疗疾病，纠正人体本身基因结构或功能上的错乱，阻止病菌的侵染 ，杀灭病变的细胞或抑制外源病原体遗传物质的复制，保证人体健康。 9.4.1 基因治疗的历史沿革 1990年，科学家第一次用反转录病毒为载体，把腺苷脱氨酶基因（ADA）导入来自病人自身的T淋巴细胞，经扩增后输回患者体内，获得成功。标志着基因治疗时代的开始。 9.4.1.1 基因治疗的前景分析 基因治疗是将具有治疗价值的基因，即“治疗基因”装配于带有在人体细胞中表达所必备元件的载体中，导入人体细胞，直接进行表达。进行基因治疗时毋须对表达产物进行分离纯化，因为人细胞本身可以完成这个过程。 可大大降低治疗成本。因为基因治疗不需要基因工程中耗资最大的器材与材料费用，显著降低了工业化的成本。 基因工程的“目的基因” 主要是分泌蛋白，而非分泌蛋白往往不能有效地排出细胞而不能应用于基因工程。但基因治疗不受上述限制。具有治疗作用，理论上均可应用于基因治疗。因此，基因治疗具有更大的潜力。 基因治疗则必须将基因直接导入人体细胞，不仅在技术上具有很大难度，而且在有效性于安全性方面提出了更为苛刻的要求。 基因治疗仅有20年的历史，不少技术还不够成熟。所以，它所遇到的风险性更大。 9.4.1.2 基因治疗的两大途径 基因治疗的两条主要途径：ex vivo与in vivo。 ex vivo途径 指将含外源基因的载体在体外导入人体自身或异体（异种）细胞，这种方法不易形成规模，而且必须有固定的临床基地。 in vivo途径 这是将外源基因装配于特定的真核细胞表达载体上，直接导入人体内。 9.4.2 基因治疗中的病毒载体 用于基因治疗的病毒载体应具备以下条件： 携带外源基因并能装配成病毒颗粒； 介导外源基因的转移和表达； 对机体没有致病力。 9.4.2.1 病毒载体的产生 研究病毒载体首先要对病毒的基因组结构和功能有充分的了解，最好在获得病毒基因组全序列信息的基础上进行。病毒包装容量不超过自身基因组大小的105%-110%。 最简单的办法是将适当长度的外源DNA插入病毒基因组的非必需区，包装成重组病毒颗粒。 9.4.2.2 病毒载体的分类 重组型病毒载体 无病毒基因的病毒载体 9.4.2.3 病毒载体在基因治疗中的应用 表（8-8）常用病毒载体的特性和适用范围 病毒载体 生物学特征 适用范围 反转录病毒载体 可感染分裂细胞 整合到染色体中 表达时间较长 有致癌的危险 ex vivo 基因治疗 肿瘤基因治疗 腺病毒载体 可感染分裂和非分裂细胞 in vivo 基因治疗 肿瘤基因治疗 疫苗 不整合到染色体中 外源基因表达水平高 表达时间较短 免疫原性强 病毒载体 生物学特征 适用范围 腺病毒伴随病毒载体 可感染分裂和非分裂细胞 整合到染色体中 无致病性，免疫原性弱 可长期表达外源基因 在骨骼肌、心肌、肝脏、视网膜等组织中表达水平较高 in vivo 基因治疗 ex vivo 基因治疗 遗传病基因治疗 获得性慢性疾病的基因治疗 疱疹病毒载体 具嗜神经性，可逆轴突传递 可潜伏感染 容量大 可感染分裂和非分裂细胞 神经系统疾病的基因治疗