分子标记技术在凡纳滨对虾遗传多样性研究中的应用及研究现状精要.pptxVIP

分子标记技术及其在凡纳滨对虾遗 传多样性研究中的应用及研究现状 以微卫星标记为主;2;又称南美白对虾 节肢动物门、甲壳纲、十足目、 游泳亚目、对虾科、滨对虾属;2. 我国凡纳滨对虾养殖现状; 2000年以后我国才开始有凡纳滨对虾遗传育种工作的报道，截至目前为止，国内已选育出4个凡纳滨对虾新品种，分别是： “科海1号”(2010，中科院海洋研究所)； “中兴1号”(2010，中山大学)； “中科1号”(2010，中科院南海所)；“桂海1号”(2012，广西水产研究所) 自主选育新品种仍处于研发和推广阶段;常用方法： “家系构建 + 家系内个体选择” 通过建立大量家系，并对不同家系进行性状测试和选择，达到选育目的。;分子标记 能反映生物个体or种群间基因组中某些差异特征的DNA片段，是DNA水平遗传多态性的直接反应。 分子标记的特点： a. 在生??体各组织均能检测到，不受季节和环境限制； b. 数量多，遍布整个基因组； c. 多态性高，无需专门创造特殊的遗传材料； d. 表现为中性，不影响目的性状的表达； e. 多为共显性，可区分纯合子和杂合子。; 对虾等甲壳动物再生长过程中需经历多次蜕皮，因此体外标记法并不适用。而体内植入标记法无法实现早期标记，因处于仔虾期的个体较小，植入困难，且植入后便失去商业价值。 DNA分子标记克服了物理标记的缺陷，实现了不同对虾家系在早期进行混养，从而保证了它们的生长环境相同。; 即线粒体中的遗传物质，其分子量小（15.7~19.5kb）、结构稳定、单（母）系遗传、不存在重组现象。 通过对mtDNA全序列或部分基因进行测定和分析来探讨物种进化关系。其中关于12sRNA、16sRNA和COI等基因片段的研究较多。 ;原理 用人工合成的随机寡聚核苷酸为引物对待分析个体的基因组DNA进行PCR扩增。因不同个体基因组DNA序列之间存在差异，引物结合的位点就会位于不同的区段，因而扩增产物的大小和数量就会有差别，进而表现出多态性。 优点：所需DNA量少、无需预先知道模板DNA的序列组成； 缺点：可重复性差、无法区分纯合子与杂合子。 常用于种群生物学研究;1）家系鉴定 早些时候，Garcia等人利用RAPD技术对培育的凡纳滨对虾家系进行研究，结果不同家系呈现不同的电泳图谱，因而认为RAPD标记作为凡纳滨对虾家系培育过程中不同家系鉴别的分子标记的潜力很大，有利于加快凡纳滨对虾纯系的建立。 2）遗传多样性分析 在中国，张海琪等利用RAPD技术对2个凡纳滨对虾养殖群体的遗传多样性进行了分析，结果表明浙江省养殖的SPF南美白对虾子一代遗传多样性水平低于普通的南美白对虾。;突变会使酶切位点缺失or增加，从而产生数目/长度不等的DNA片段;1）群体遗传差异分析 李峰等人用Hinf I、Sty I和Taq I这3种酶切位点的酶，对两个引进的凡纳滨对虾亲本群体及其各自F1代进行RFLP分析，获得了两种基因型，且内切酶Sty I在三个群体DNA扩增产物的酶切中表现出明显的差异。 2）品系鉴定 Sukriye等利用Dde I、Mbo I、Mbo II和Mse I这4种内切酶对短沟对虾、欧洲对虾、长额拟对虾和刀额新对虾这四种对虾的遗传分化进行了RFLP分析，结果发现单一内切酶无法将这4种对虾区分开，但用任两种联用即可将其完全分开。;基因组DNA双酶切（产生不同大小限制性片段） 互补接头连接 半特异引物扩增（引物种类决定了扩增片段的特异性） 扩增产物经放射性同位素标记、PAGE分离，即形成DNA指纹 ;1）遗传多样性分析 包秀凤用AFLP技术对4个引进群体和3个国内养殖群体的凡纳滨对虾进行了遗传多样性及遗传差异分析，用7对选择性引物对群体的210个个体进行扩增，最终检测到85.71%的多态位点，并认为检测的7各群体均具有较高的遗传多样性，且各群体间存在显著的遗传分化。 2）遗传差异分析 王豪杰等用10对AFLP引物组合对4个不同世代的凡纳滨对虾进行遗传分析，以探讨亲本与F1、F2、F3和Fn4世代群体间的遗传差异，通过对各群体的多态位点比例及Shannon多样性指数的对比，结果表明亲本与F1代，F2代与Fn4代相互间的遗传距离更为紧密。; EST是cDNA序列的一部分。 将mRNA反转录成cDNA之后，克隆到载体构建cDNA文库，然后对形成的cDNA克隆进行大规模挑选