分子生物学精华精要.docVIP

1.病毒、原核和真核生物的基因结构，基因组结构异同? A原核生物基因组的特点：环状双链闭合DNA无染色体结构，只有一个复制起始点具有操纵子结构绝大部分为单拷贝 可表达基因约50%，大于真核生物小于病毒基因是连续的，无断裂结构，无内含子基本无重复结构细菌基因组中存在有可移动的DNA序列，包括插入序列和转座子具有编码同工酶的基因 B真核生物基因组的特点为线状的DNA绝大多数为二倍体，结构复杂，基因数目多，具有多个复制起点单顺反子基因组中非编码区多于编码区仅2-3%的DNA为编码序列真核生物多为不连续的断裂基因，内有内含子存在大量的重复序列功能相关的基因构成各种基因家族以及假基因存在可移动的遗传因素 C病毒基因组特点：1.种类单一；2、单倍体基因组，每个基因组在病毒中只出现一次；3、基因组大小变异大，连续或不连续基因组，核酸组成多变；4、有基因重叠现象。5、基因是否有内含子与宿主细胞保持一致；6、基因编码区无间隔，编码序列大于90%，通过宿主或病毒本身酶切，一个基因产物翻译后可酶切出多个蛋白。7、具有不规则结构基因；8、无帽状结构；9。结构基因没有翻译起始序列。10、基因组相关基因常丛集排列呈现转录单元。 2.质粒的结构功能和在分子生物学中的重要性? 结构功能：质粒是存在于细菌染色体外的结构，具有自主复制能力的环状双链DNA 分子能独立复制和表达；宿主依赖；耐药性的基础；具有不相容性（DNA克隆的基础）； 重要性;质粒带有某些特殊的不同于宿主细胞的遗传信息，所以质粒在细菌内的存在会赋予宿主细胞一些新的遗传性状，如对某些抗生素或重金属产生抗性等。根据宿主细胞的表型可识别质粒的存在，这一性质被用于筛选和鉴定重组DNA。 3.PCR的原理,反应流程,RT-PCR，PCR与基因复制的异同？ 原理：在微量离心管中,加入适量的缓冲液, 微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热性多聚酶, 一对DNA的引物,产生酶促反应,通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段反应使特异区段的基因拷贝数倍增；并进行循环，每一次循环基因拷贝数放大一倍, 经过30次循环,最终使基因放大数百万倍。 反应流程:高温变性（denaturation，94℃），通过加热使模板DNA双螺旋的氢键断裂，解链成单链DNA；低温退火（anealing　55℃），反应混合物降温，引物与单链DNA模板的互补序列结合，形成模板-引物复合物；中温延伸（extension 70℃左右），将反应混合物升温，在Taq DNA聚合酶作用下，以碱基互补的原则合成一条新的DNA单链. 这三个步骤要重复30-40次 RT-PCR: 提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,它使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，因此让一些极微量的RNA样品分析成为可能。 相同点：以亲代的DNA为模板，在酶的作用下，以半保留方式合成具有相同序列的新的子代DNA，实现模板包含的遗传信息的复制。 与基因复制的不同点：DNA复制是以自身为模板边解旋，边复制，边折叠的。自身DNA复制有一个变构问题。PCR是一个个核苷酸或脱氧核苷酸用酶接上去，再洗脱再接下一个的，形成的是单链，而且没有包裹的蛋白。DNA复制在细胞内进行，复制产物为双链DNA：PCR是一个体外过程，复制产物可以双链也可以是单链他们的酶不同，反应条件也不同DNA复制时细胞内的DNA成倍增加；PCR扩增的是特定的序列 PCR可以复制DNA也可以复制RNA；基因的DNA复制仅进行DNA复制PCR的扩增平均每1000个碱基，就有两个错误，保真性远不及基因的DNA复制 4端粒与端粒酶（性质，功能作用，与疾病的关系）？ 端粒性质：是染色体末端的一种特殊结构，是DNA与相关蛋白质的复合体。功能作用：维持染色体结构的完整性，防止染色体被核酸酶降解及染色体间互相融合防止染色体结构基因在复制时丢失，解决了末端复制的问题。与疾病的关系 端粒酶性质：是RNA与蛋白质组成的核糖核蛋白，是一种RNA依赖性DNA聚合酶。功能作用：是维持端粒的长度，他能利用端粒3’端单链为引物，自身的RNA为模板合成端粒重复序列添加到染色体末端，从而延长端粒的长度，保证DNA分子在复制过程中不会缩短。与疾病的关系 5细胞分化与细胞基因表达？ 表达指DNA中储存的信息通过生物过程合成活性分子，DNA编码的活性分子有：活性RNA，包括tRNA 、rRNA 以及其他催化活性RNA蛋白质的合成必须要经过mRNA阶段才能实现；现大部分基因表达指蛋白质的表达；所以基因表达一般包括转录和翻译两个部分的内容。 转录：以DNA为模板，4种NTP为底物，依碱基配对规律，在DNA指导下合成RNA。 一、原核生物转录 RNA 聚合酶