生化分析仪和其试剂间化学污染对检测结果影响.docVIP

??? 全自动生化分析仪及测定试剂盒目前已在各医院检验科大量应用，但在检测病人标本时，由于存在试剂间的化学污染，检测结果的可靠性受到一定程度的影响[1-4]，这一点目前并未得到生化检验人员足够的重视。出现问题时，往往未能追究原因，以避免相似问题的再发生。本文结合实际，探讨试剂间化学交叉污染的来源及如何避免的对策，希望引起检验人员重视，以减少此类污染带来的结果准确性问题。 一、试剂间化学污染的来源 ??? 全自动生化分析仪发展迅速，具有多项目、多样本的处理能力，检测速度不断提高，但由于共用吸样针、试剂针、搅拌棒以及比色杯，当生化仪长期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起吸附力增加、生化仪内污垢的积聚、测试顺序安排不当，且常规清洗不能有效消除交叉污染时，就会增加试剂间化学污染的可能性，引起测定结果偏高或偏低。 ??? 1．试剂针污染：目前大多数全自动生化分析仪采用双试剂检测样本，试剂R1、R2的吸取与吐出，一般分别只配有一套试剂针。当试剂针在清洗不完全，或黏附力增加时，残留试剂可能会对下一相邻检测项目的检测结果造成影响。??? 2．搅拌棒污染：在试剂与样本混合后，往往需要用搅拌棒加以混匀，而搅拌棒若清洗不完全，或黏附力增加时，残留试剂及样品就会对下一相邻检测项目的检测结果造成影响。??? 3．比色杯污染：生化分析仪的比色杯一般是循环使用的，每个比色杯检测完毕后，进行清洗，然后继续下一个检测项目的检测。当某个比色杯清洗不完全时，吸附在比色杯上的上一个项目的残留试剂，可能会对在这个比色杯中进行的下一个项目的检测结果造成影响。以上3种可能的污染，以比色杯污染最为严重，因为比色杯最难以清洗干净，且在实际工作中难以判断该比色杯上一测试的项目；试剂针吸量较大，亦难以清洗干净。 二、试剂间化学污染的类型 试剂间化学污染的原因很多，常见的类型主要有以下几种： ??? 1．试剂成分的直接污染：上一个测定试剂中含有下一个测试所要测定的物质，直接干扰下一检测的测定结果。如：淀粉酶（AMY）试剂中含有较高浓度的钙（Ca2+）；碱性磷酸酶（ALP）（IFCC法）、肌酸激酶（CK）（NAC法）、肌酸激酶-MB（CK-MB）（NAC法）、二氧化碳（CO2）（PEPC法）、AMY（EPS法）、三酰甘油（TG）等试剂中含有镁（Mg2+）；葡萄糖（GLU）（氧化酶法）、总蛋白（TP）与酸性磷酸酶（ACP）试剂中含有较高浓度的钾（K+）；胆碱酯酶（ChE）、总胆固醇（CHOL）、GLU (GOD法)、尿酸（UA）(尿酸酶法)、乳酸脱氢酶（LD）(IFCC法)、羟丁酸脱氢酶（HBDH）(DGKC法)等试剂中可能含有磷酸缓冲液；CHOL、TG试剂及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂中可能含有胆酸钠；丙氨酸氨基转移酶（ALT）(IFCC法)、天冬氨酸氨基转移酶（AST）(IFCC法)试剂中含有高活性的LD；以上试剂的交叉污染就分别会对Ca2+、Mg2+、K+（紫外酶法）、磷（P）、总胆汁酸（TBA）及LD的测定结果造成干扰。??? 2．试剂成分参与反应：上一个试剂中含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而干扰下一反应的测定结果。如：(1)Mg2+测定试剂的络合剂亦能与铁（Fe）结合，影响铁与铁络合剂的结合；(2)直接胆红素（DBil）（重氮法）试剂含有EDTA，Mg2+试剂中含有EGTA，均能与Ca结合，从而影响Ca的测定；(3)以甘油作为酶保护剂的试剂，会对TG的测定带来干扰；(4)钙（MTB法）试剂对K+有负干扰；(5)CHOL试剂中含有胆固醇酯酶，可水解胆固醇酯形成游离胆固醇，而引起对游离胆固醇测定的干扰。 ?? 3．反应进程相同：上一个试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。如：(1)当上一反应产物为H2O2时，则对以Trinder反应产生颜色的测定结果引起干扰。如UA对CHOL结果的影响；CHOL对肌酐（CREA）（酶法）测定结果的影响；GLU（氧化酶法）对CREA（酶法）测定结果的影响。(2)CK(NAC法)、CK-MB(NAC法)试剂中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶（HK）反应过程，因此可能对GLU的测定带来干扰，尤其对GLU的HK法测定可能带来严重干扰。??? 4．影响反应条件：影响下一个项目的反应条件如pH等，从而改变反应速率。如：(1)DBil（钒酸盐氧化法）试剂中含有表面活性剂的酒石酸盐缓冲液会影响ALT活性，对测定结果有负干扰。(2)CREA（苦味酸速率法）反应条件为碱性，果糖胺（动力学法）反应条件为酸性，受到污染后反应速率会减慢。(3)CREA（酶法）试剂中含有抗坏血酸氧化酶，影响了氧化还原反应的进程，会对TBA（酶循环法）测定结果有