线粒体和细胞核的制备和观察.docVIP

华 南 师 范 大 学 实 验 报 告 学生姓名 何茂辉 学号 20062501302 专 业 生物科学 年级、班级 06科三 课程名称 细胞生物学实验 实验项目 实验类型 □验证 □设计 □综合 实验时间 09 年 5 月 12 日 实验指导老师 尤蓉周仁超 线粒体和细胞核的制备与观察 实验目的： 掌握用差速离心法分离动物细胞核及线粒体的技术。 掌握细胞核的鉴定以及线粒体活性染色鉴定。 实验原理： 1.制备线粒体及细胞核采用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心的方法。 2.詹纳斯绿B是一种活体染料，能对动植物的细胞或组织在活体状态下进行无毒害的染色。 3.线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶,该酶能使脂溶性的詹纳斯绿B染料保持在氧化状态呈现蓝绿色，从而使线粒体显色，而胞质中的染料被还原成无色。 4.Gimesa是一种复合染料，即为酸性染料与碱性染料的结合物。 实验步骤： 用颈椎脱臼法处死小鼠，置于解剖盘中剪开腹腔，取小白鼠肝剪成小块放入小烧杯内用吸管吸取生理盐水，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。 加预冷的0.25mol/L蔗糖缓冲液匀浆(10ml,分次加) 双层尼龙布过滤，滤液(制 2 张涂片①,1张自然干燥） 将滤液5mL覆盖于相同容积的0.25mol/L蔗糖缓冲液上 700×g离心10min，沉淀（细胞核及碎片,制一张涂片③） 上清液11000×g离心10 min，上清液(制一张涂片B) 显微镜检测 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 用消毒牙签的钝端在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取口腔上皮细胞，均匀地涂布在载玻片上的染液中，染色5-15min。 盖上玻片，四周溢出的染液用吸水纸吸干。 低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即为线粒体。 结果与分析： 表1 各涂片观察结果 编号 观察结果 ① 没有多余的血细胞，细胞核分布较少且不清晰，含有较多的混杂的细胞质碎片 ② 较多杂质与线粒体混杂，细胞核含量极少 ③ 含有较多的细胞核与少量的杂质碎片，细胞核形态较清晰 A 视野中的线粒体数量较多，形态较清晰，杂质较少 B 线粒体数目极少，多为杂质 纯化后的线粒体装片即涂片A视野中的线粒体数量较多，呈蓝绿色,小棒状或哑铃状，杂质较少，分离的线粒体的纯度较高。