第二动物组织和细胞培养精要.ppt

4、多型细胞型： 有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。 * 三 培养细胞的生物学特征 洋蔥的表皮細胞 植物輸導水分的細胞 哺乳類的肌肉細胞 人類脊髓神經細胞 (一)体外培养细胞的分型 1 贴附型： 大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞. 有机体的绝大多数细胞必须粘附于一固相表面才能生存和生长  1)成纤维细胞型： 胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型 例 心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮 成纤维细胞 细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。 如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。 2)上皮细胞： 上皮型细胞 3、游走细胞型： 　　呈散在生长，一般不连成片，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。如单核细胞 、嗜酸性粒细胞 2 悬浮型： 见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。 (二)培养细胞的生长和增殖过程 1 培养细胞生命期（Life Span of Culture Cells） 　　所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。 1．原代培养（Primary Culture）期：　　也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。 ●初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。细胞相互依存性强。 2．传代期：●初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系（Cell Line）。 ●在全生命期中此期的持续时间最长。 ●在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系（Diploid Cell Line）。 ●为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。 ●当前世界上常用细胞均在不出十代内冻存。 ●一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。 3．衰退期：●此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。 ●在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点（多发生在传代末或衰退期），由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化（Spontaneous Transformation）。 ●转化的标志之一是细胞可能获得永生性（Immortality）。 ●细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系（Infinite Cell Line），也称连续细胞系（Continuous Cell Line）。 ●无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第三期初阶段。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体（Heteroploid）。 ●细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能永生性. 培养细胞生命期 衰退期 传代期 原代培养期 2 组织培养细胞一代生存期 　　所谓细胞“一代”一词，系仅指从细胞接种到分离再培养时的一段时间，如某一细胞系为第153代细胞，即指该细胞系已传代153次。它与细胞倍增〔Doubling）不同；在细胞一代中，细胞能倍增3～6次。细胞传一代后，一般要经过以下三个阶段： 1．潜伏期（Latent Phase）：●细胞接种培养后，先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期。 ●此时细胞胞质回缩，接着是细胞附着或贴附于底物表面上，称贴壁，悬浮期结束。 ●各种细胞贴附速度不同，这与细胞的种类、培养基成分和底物的理化性质等密切相关。 ●初代培养细胞贴附慢，可长达10～24小时或更多；连续细胞系和恶性细胞系快，10～30分钟即可贴附。 ●支持物能影响细胞的贴附；底物表面不洁不利贴附，底物表面带有阳性电荷利于贴附。 ●另外在贴附过程中，有一些特殊物质如纤维连接素（Fibronectin），细胞表面蛋白（Cell Surface Protein：CSP）等也参与贴附过程。 ●细胞接种密度大时潜伏期短。 细胞贴附 2．指数增生期（Logarithmic growth Phase）：●这是细胞增值最旺盛的阶段，细胞分裂相增多。●一般以细胞分裂指数（Mitotic Index：MI）表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。 ●一般细胞的分裂指数介于0.1%～0.5%，初代细胞分裂指数低，连续细胞和肿瘤细胞分裂指数可高达3%～5%。 *