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扬 州 大 学 本 科 生 毕 业 论 文 毕 业 论 文 题 目：姓 名： 所 在 学 院： 食品科学与工程学院 专 业 及 班 级： 食品班 指 导 教 师： 徐 鑫 副教授 兔肺血管紧张素转换酶的分离提取 姓名：庄 涛 班级：食安0902 指导教师：徐 鑫 副教授 摘要ACE常用于降压药物或高血压研究，但购买商品酶成本高，本实验采用硫酸铵分级沉淀方法分离提取ACE。取新鲜兔肺匀浆离心后，经35%~55%饱和度的硫酸铵分级沉淀、透析、冷冻干燥后得到自制酶。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条带，相对分子质量为165kD。通过液相色谱法实验表明，自制ACE酶存在较强活性，自制的小黄鱼ACE抑制肽对分离得到的兔肺ACE与商品ACE酶的抑制效果相差不大，且活性较为稳定，因此，自制的ACE酶可以直接用于实验室的相关实验。 关键词:兔肺 血管紧张素转换酶 分离纯化 活性检测 Student: ZhuangTao Class: Food Quality and Safety 0902 Teacher: XU Xin Abstract: ACE is commonly used in the research of antihypertensive medications or high blood pressure. But it is expensive to buy commodity enzyme. The experiment adopted ammonium sulfate fractionation in the separation of ACE. 170g fresh rabbit lung was homogenated and centrifugated with 35%-55% saturation ammonium sulfate fractionation, dialyzed and freeze-dried. It would obtain 1.0548g homemade enzyme. Final enzyme preparation on analytical polyacrylamide gel electrophoresis showed one major protein band. The molecular weight estimated to be approximately 165000 dalton by sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gel electrophoresis. HPLC experiment showed that the homemade enzyme had activity and there was hardly different on the inhibitory effect by little yellow croaker ACE inhibitory peptide between homemade enzyme and commodity enzyme. And the activity was relatively stable. Consequently, the homemade enzyme could be directly used in laboratory experiments. Keywords: rabbit lung; angiotensin-converting enzyme; separation and purification; activity detection 目录 4 1.1 高血压及ACE 4 1.2 ACE调节血压的作用机理 6 1.3 ACE的来源及其选择 7 1.4 ACE的分离纯化方法 7 1.5 本研究的目的及内容 8 2 材料与设备 9 2.1 主要试剂和材料 9 2.2 主要仪器设备 10 3 实验方法与步骤 11 3.1 小黄鱼ACE抑制肽的制备 11 3.1.1 制备小黄鱼ACE抑制粗肽 11 3.1.2 蛋白测定 12 3.2 ACE粗提液的制备 12 3.3 硫酸铵分级沉淀 13 3.3.1 硫酸铵的第一次分级沉淀 13 3.3.2 硫酸铵的第二次分级沉淀 13 3.4 透析 13 3.5 冷冻干燥 13 3.6 样品蛋白含量的测定 13 3.7 SDS检测ACE粗酶蛋白分布情况