第二种子扩大培养精要.ppt

第二章 第五节 种子扩大培养 定义：菌种的扩大培养就是把保藏的菌种，即砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化，再经过扁瓶或药瓶和种子罐，逐级扩大培养后达到一定的数量和质量的纯种培养过程。这些纯种的培养物称为种子。 种子必须具备的条件 ①菌种细胞的生长活力强，接种后在发酵罐 中能迅速生长 ②生理性状稳定 ③菌体总量和浓度能满足大容量发酵罐的要 求 ④无杂菌污染（不带杂菌） ⑤生产能力稳定 几个概念 种子罐级数：种子在种子罐中需扩大培养的次数。 发酵级数：种子罐的级数加一。 接种量：放罐的种子罐的培养液体积除以接种后培养液的体积的百分数。 种龄：生产种子的培养时间。 一、种子扩大培养流程图 （一）实验室种子的制备两种方式：在固体培养基上生产大量孢子的孢子制备过程 在液体培养基中生产大量菌丝的种子制备过程。 产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁殖快的菌种：采用固体培养基培养孢子，孢子可直接作为种子罐的种子，这样操作简便，不易污染杂菌 产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可以用液体培养法。 1．孢子制备 孢子制备是种子制备的开始，是发酵生产的一个重要环节。孢子的质量、数量对以后菌丝的生长、繁殖和发酵产量都有明显的影响，不同菌种的孢子制备工艺有其不同的特点。 (1)放线菌孢子的制备 琼脂斜面培养基： 适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等； 碳源和氮源不要太丰富 (碳源约为1％，氮源不超过0.5％)。 碳源丰富：生理酸性环境，不利于放线菌孢子的形成； 氮源丰富：有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。 一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。 放线菌斜面的培养温度大多数为28℃，少数为37℃，培养时间为5～14天。 用哪一代的斜面孢子接入液体培养，视菌种特性而定。 母斜面孢子接入液体培养基有利于防止菌种变异， 子斜面孢子接入液体培养基可节约菌种用量。 菌种进入种子罐有两种方法： 孢子进罐法，即将斜面孢子制成孢子悬浮液直接接入种子罐．此方法可减少批与批之间的差异，具有操作方便、工艺过程简单、便于控制孢子质量等优点，孢子进罐法已成为发酵生产的一个方向。 摇瓶菌丝进罐法，适用于某些生长发育缓慢的放线菌，此方法的优点是可以缩短种子在种子罐内的培养时间 (2)霉菌孢子的制备 培养基：天然农产品如大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等；营养成分较适合霉菌的孢子繁殖；培养基表面积较大，可获得大量的孢子。 霉菌的培养一般为25~28 ℃ ，培养时间为4～14天。 (3)细菌培养物的制备 细菌的斜面培养基多采用碳源限量而氮源丰富的配方，牛肉膏、蛋白胨常用作有机氮源。 培养温度：多数为37℃，少数为28℃。 培养时间：1—2天，产芽孢的细菌则需培养5一10天。 (4)斜面种子的制备 斜面种子：在试管或扁瓶内，琼脂固化的培养基表面上生长的菌种培养物。 制备流程：略 制备过程注意事项： A?琼脂要完全浸没在营养液内，用量1.0%-2.5% B 营养液中最好不含易沉淀的固形物； C 装量掌握在斜面顶端不超过试管或扁平长度的2/3； D 灭菌后垂直放置至稍冷后再斜放，以减少冷凝水 ； F 微量元素先配制成一定的溶液，用移液管定量加入。 影响斜面种子质量的因素 (1)原材料质量，水质，培养基pH (2)灭菌条件 (3)接种量 (4)培养室温度、湿度、通风 (5)培养时间 (6)有害气体或挥发物（培养室内不要安紫外灯） (7) 冷藏条件 2.液体种子制备 （1）好氧培养 如链霉菌等，其过程如下： 试管→三角瓶→摇床→种子罐 （2）厌氧培养 对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等），其种子的制备过程如下： 试管→三角瓶→卡式罐→种子罐 种子制备 将固体培养基上培养出的孢子或菌体转入到液体培养基中培养，使其繁殖成大量菌丝或菌体的过程。 种子制备所使用的培养基和其他工艺条件，都要有利于孢子发芽和菌丝繁殖。 （二）生产车间种子制备  实验室制备的孢子或液体种子移种至种子罐扩大培养，种子罐的培养基虽因不同菌种而异，但其原则为采用易被菌利用的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐等，如果是需氧菌，同时还需供给足够的无菌空气，并不断搅拌，使菌（丝）体在培养液中均匀分布，获得相同的培养条件。 1.摇瓶种子制备 孢子发芽和菌丝繁殖速度缓慢的菌种，需将孢子经摇瓶培养成菌丝后再进入种子罐