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GOD-POD法测血糖与回收试验 浙江中医药大学生命科学学院 生化教研室 【实验目的】 掌握血糖测定的常规方法、血糖测定的临床意义。 掌握回收试验的原理和方法。 【实验原理】 1.血清中（溶液中）的葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶作用下，使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物生成量与葡萄糖含量成正比，在492nm下测定吸光度值，与葡萄糖标准液比较，即得到待测液葡萄糖浓度。 葡萄糖氧化酶 葡萄糖 葡萄糖酸+ H2O2 过氧化物酶 H2O2 +苯酚+４氨基安替比林 红色醌 【实验原理】 2. 回收试验用于评价候选方法的比例系统误差，通过正确测定加入常规分析样品中的纯分析物，计算回收率来判断比例系统的误差的大小，对方法的准确性做可靠性评价。 【试剂与器材】 试剂： 1. 葡萄糖测定试剂盒：5.55mmol/L葡萄糖标准液、R1：磷酸盐缓冲液100mmol/L pH7.5、苯酚10mmol/L、R2：磷酸盐缓冲液100mmol/L pH7.5，葡萄糖氧化酶16000U/L，过氧化物酶1000U/L，4-氨基安比替林2.0mmol/L 2. 80mmol/L葡萄糖溶液、蒸馏水、生理盐水 3. 血清 器材：酶标仪，酶标板，板条，微量进样器，1.5ml塑料离心管，试管 【实验步骤】 1.配置测血糖的工作试剂： 取R1 4.5ml与R2 0.5ml混合在10ml试管中。 2.测定样本血糖浓度： 取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2,A3，测定孔A4,A5。 A1 A2 A3 A4 A5 【实验结果】 血清浓度测定 加入浓度计算： 样品I加入浓度= 3. 回收量计算（测得浓度－基础样品的测得值） 4. 5.计算平均回收率。 2.加入浓度的测定 加入浓度（mmol/L）=标准液浓度*标准液量（ml）/ [血清量(ml)+标准液量（ml）+生理盐水（ml）] 样品I加入浓度=80*0.005/（0.45+0.005+0.045）=0.8mmol/L 样品II加入浓度=80*0.03/(0.45+0.03+0.02)=4.8mmol/L 样品Ⅲ加入浓度=0.045*80/（0.45+0.005+0.045）=7.2mmol/L 3.回收量计算（测得浓度-基础样品的测得值） ①样品A浓度配置：样品A浓度配置： 测得牛血清葡萄糖浓度为4.26mmol/L，稀释至2.2mmol/L。 估计总加入牛血清样品2Ml,则设需4.26mmol/L 血清vml ， 根据 C1V1=C2V2 则2.2mmol/L*2ml=4.26mml/L*vml V=2.2*2/4.26ml=1.03ml, 因此需要4.26mmol/L 牛血清1.03ml，加入生理盐水0.97ml（2—1.03） 配置浓度2.2mmol/L的血清2Ml。 ②置配样品 基础样品：样品A 0．45ml+0．05ml生理盐水 回收管I：样品A 0.45ml+0．005ml 80mmol／L葡萄糖 标准液+0．045ml生理盐水 回收管Ⅱ：样品A 0.45ml+0．03ml 80mmol／L葡萄糖 标准液+0．02ml生理盐水 回收管Ⅲ：样品A 0.45ml+0．045ml 80mmol／L葡萄 糖标准液+0．005ml生理盐水 ③测吸光度 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 A11 吸光度 0.000 0.258 0.266 0.082 0.086 0.112 0.130 0.306 0.310 0.417 0.444 平均吸光度0.000 0.262 0.084