阿魏酸酯酶的研究与应用精要.pptVIP

用电击法转化感受 态毕赤酵母GS115. 将转化的毕赤酵母涂 布于MD琼脂平板上 培养2 d 挑取单菌落, 在BMGY中培养1d 离心收集菌体 提取其基因组DNA 进行PCR验证 质粒转化情况 挑取质粒转化成 功的阳性菌落，在BMGY培养基中 培养2 d（30℃、200rmp) 离心收集的菌体 重悬于10 mL BMMY培养基 同样条件继续培养 3 d，每天补加50 μL 的甲醇 7.3酶活的快速检测 反应体系为1 mL，其组成为：100 μL体积10 mmol/L的阿魏酸对硝基苯酚酯的DSMO溶液，800 μL含有2.5% (V/V)的Triton X-100的0.1 mol/L磷酸钠缓冲液 (pH 6.4)和100 μL的酶溶液。 在40 ℃反应30 min后于410 nm波长处测定阿魏酸对硝基苯酚酯降解生成对硝基苯酚的吸光度，并计算出生成对硝基苯酚的浓度。 7.4部分实验步骤： 1、PCR扩增：（小试，共20μL） ①ddH2O 14.4μL 72 μL 10× PCRbuffer 2μL 10μL 引物1（10μM） 1μL 5μL 引物2（10μM） 1