单克隆抗体的制备分析.pptVIP

抗体制备 多克隆抗制备 单克隆抗制备 动物产生抗体的机理 抗原（非自己的物质）免疫动物 激活免疫B细胞 转化成浆细胞 分泌特异性的抗体 单克隆抗体制备原理 单克隆抗体杂交瘤技术基本流程 单克隆抗体的制备步骤 1.免疫原的制备 ： 完全抗原：病毒、细菌、真菌等微生物和蛋白质等分子量大于5000Da生物物质 半抗原：多糖、药物、激素、肽类等分子量小于5000 Da 物质 半抗原需与BSA、OA等载体交联后成完全抗原才能刺激动物产生可应用的高效价的抗体 2.免疫动物 选择体重18－20g BALB/C 雌性小鼠，用制备抗原免疫。50—100ug抗原/只与等体积福氏完全佐剂混合，充分乳化后，经背腹部皮下多点注射0.5ml每只，间隔3周，取与一免等量抗原和等体积的福氏不完全佐剂充分乳化后，第二次皮下多点注射0.5ml每只，过3周后用加倍剂量的抗原进行腹腔注射，3天后取脾细胞进行融合。 一只兔子每次的免疫剂量：细胞抗原不低于1x107 ；可溶性抗原100ug－1mg；合成抗原为2mg（半抗原约为20－200ug），选用皮内、皮下、肌肉、静脉、或淋巴结内途径进行免疫，一般抗原免疫3－4次，合成抗原免疫6次以上，两次免疫间隔时间3周 3.细胞融合 取上述免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）按5-10：1的比