基因工程工具--分析.ppt

一、基因工程 （一）基因工程的概念 什么叫平末端？ 限制酶所识别的序列有什么特点？ 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 图1-1 限制酶识别序列的中心轴线 磷酸二酯键 思考： DNA连接酶与DNA聚合酶的异同点？ 相同点：都形成磷酸二酯键 不同点： ①DNA连接酶在两个DNA片段间形成磷酸二酯键，DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段上； ②DNA连接酶不需要模板，DNA聚合酶需要模板。 3、基因进入受体细胞的载体—”分子运输车“ （1）载体的作用： 作为基因运载工具：将外源基因导入受体细胞； 使外源基因在受体细胞中稳定遗传和表达。 （2）常见的载体种类 质粒（最早应用）、噬菌体、一些动植物病毒等。 质粒是一种相对分子质量较小、独立于细菌核区DNA之外的环状DNA，有的细菌有一个，有的细菌中有多个。 最简单的质粒载体必须包括三个部分： 复制区（复制原点）；遗传标记基因（主要是抗性基因）；目的基因的插入位点P12 现在使用的质粒载体几乎都是经过改建的。 （3）载体必须至少具备三个条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存； ②具有一至多个限制酶切割位点，便于外源DNA分子的插入； ③具有某种标记基因；便于进行筛选。 它的存在有否对受体细胞生存无决定性作用；低分