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第三节 蛋白质的共价结构　 肽 蛋白质的一级结构及序列测定 蛋白质的氨基酸序列与生物功能 肽与蛋白质的人工合成 一、肽 肽和肽键的结构 肽的两性解离 肽的化学性质 天然存在的活性肽 1.肽和肽键的结构 肽是氨基酸的线性聚合物。 氨基酸顺序：N端－?C端 氨基酸残基；寡肽与多肽；环肽 肽键的特点 具有部分双键特性，不能自由旋转,呈现相对的刚性和平面化。 肽键的亚氨基没有明显的解离和质子化。 除脯氨酸外多以反式结构存在。 肽平面、肽单位、二面角 多肽中的二硫键 肽的命名 开链肽都具有游离的α氨基和α羧基？ 有的开链肽的N端或C端的游离的α氨基或α羧基被别的基团结合（如烷基化、酰化等）或N端残基自身环化（如：谷氨酸）。 脯氨酸在N端也没有游离的α氨基。 2.肽的两性解离　　 166页 具有两性解离和等电点： 多肽链中可解离功能团的pKa值） 例：pH7时，所带静电荷是？pI是？　 是 0 pI=(4.6+7.8)/2 求：三肽Lys-Lys-Lys的pI 每个侧链解离后带有1/3个正电荷，此时的pH为pI。 利用公式： pH = pKa + lg（[碱]/[酸]） 　　　　pH = 10.2＋ lg（[2/3]/[1/3]） pH = 10.2＋0.30 3.肽的化学反应 多肽链的水解：酸水解、碱水解、酶水解 具有旋光性 颜色反应 紫外吸收 颜色反应 茚三酮反应－－紫色，用于定性和定量肽。 双缩脲反应－－紫色或兰紫色(λ＝540nm）。 －－－双缩脲法测定蛋白质的含量 含有两个或两个以上肽键的化合物有此反应。氨基酸没有 　 紫外吸收 具紫外吸收：在280nm处有最大吸收峰，可进行肽类定量测定。 原因是： 含Trp、Tyr、Phe 　　　　　－－－－紫外吸收法测定蛋白质含量 4.天然存在的重要多肽 以蛋白质形式存在: 相对分子质量在6000以上的多肽称为蛋白质。 多肽与蛋白质无严格的界线。 以天然活性肽形式存在： 分子量比较小的多肽以游离状态存在。具有特殊的生理功能，常称为活性肽 在天然活性肽中含有非蛋白质氨基酸和肽键。 生物活性肽(Natural peptide) 脑啡肽； 激素类多肽； 抗生素类多肽； 谷胱甘肽；　 蛇毒多肽等。 脑啡肽（五肽） Leu-脑啡肽和Met-脑啡肽。 ＋H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO－ ＋H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO－ 前体物：前脑啡肽原（含267个残基） 有和吗啡类似的镇痛作用（大脑中有吗啡受体）。 内啡肽 包括 α－内啡肽（16肽） β－内啡肽（31肽） γ－内啡肽（17肽） 前体物：促黑素促皮质激素原 多肽类抗生素：一类具有很强抗菌能力的肽. 青霉素（二肽衍生物）： 短杆菌肽（10肽）： 催产素和加压素 谷胱甘肽：γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸 谷胱甘肽重要的生物功能 作为抗氧化剂维护蛋白质活性中心的巯基游离。 参与二硫化合物相互转化。 某些酶的辅酶，在体内氧化还原过程中起重要的作用。 GSH：在红细胞中作为巯基缓冲剂存在，维持血红蛋白和其他红细胞蛋白质的半胱氨酸残基处于还原态。 肽的应用及发展 近年来，多肽的分离纯化、结构分析、化学合成、生物、放射免疫测定、免疫细胞化学以及遗传工程等新技术的应用，新的活性肽不断发现，对活性肽功能认识不断增长，促使这一领域迅速发展 练习题 在一些天然肽中含有蛋白质中不存在的___、___等特殊结构。这些结构上的变化可使这些肽免受蛋白水解酶的作用。 蛋白质之所以出现各种内容丰富的构象是因为____键和__　键能有不同程度的转动。 双缩脲反应肽、蛋白质、氨基酸都具有的反应。 在酸溶剂系统中进行纸层析分离Lys和Leu混合物，问哪种Rf大？ 用阳离子交换树脂分离PH7的氨基酸混合液Lys、Glu，问哪种先被洗脱出来？ 二、蛋白质的一级结构（化学结构）　 指蛋白质分子中氨基酸的组成、排列顺序、连接方式以及多肽链的数目和关联。（主要为肽键，包括二硫键） 是蛋白质空间结构和生理功能的基础。 蛋白质的一级结构测定　　　　　　－－－多肽链氨基酸顺序测定　 要求 样品必须是均一的。纯度在　97% 以上 知道蛋白质的分子量 步骤（待测样品分成多份分别进行各步骤测定） 测定蛋白质分子中多肽链的数目 拆分蛋白质分子的多肽链和二硫键 分析每一多肽链的氨基酸组成 测定并确定多肽链的氨基酸序列 确定原多肽链中二硫键的位置 第一步：测定蛋白质分子中多肽链的数目 测定末端基（C端或N端），看蛋白质的摩尔数与末端基的摩尔数的比例？ 若　1：1？　1：2？　1：3？ 第二步：拆分蛋白质分子的多肽链和二硫键 借助非共价相互作用缔合的（亚基之间） 采用变性剂：8mol/