奶牛乳腺炎病原分离过程.docVIP

奶牛乳腺炎病原分离 一、检测内容 检测重点阳性菌：金黄色葡萄球菌，链球菌 阴性菌：大肠杆菌， 二、目的： 细菌初步培养和鉴定 葡萄球菌流行性 药敏试验 三、采样与细菌分离 1.奶样采集 采集奶样时，先用温水将乳房擦洗干净后，以75％的酒精消毒乳头，弃去前3把奶，然后以无菌操作方法挤下约5 mL～10 mL 奶样于灭菌试管中，低温保存。乳样标明牛号和日期后，随即带回实验室进行病原菌的分离鉴定。 2. 细菌的分离培养 无菌操作吸取0.1 mI 乳样分别接种于5 mL TSB（BHI，脑心浸出液） 肉汤37℃恒温培养箱过夜培养，→划线血平皿（用于溶血定性试验，革兰氏阳性菌）and麦康凯琼脂平板（革兰氏阴性菌）→次日观察菌落形态（颜色，大小，是否溶血）、革兰氏染色→血平皿上挑单个菌落，将培养基平板置于37℃恒温培养箱培养24h，观察细菌菌落生长情况→挑取单菌落→TSB 肉汤→划线SS、EMB琼脂平板→ 3. 鉴定 注： 1. 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长10%NaCl的TSB用于分离葡萄球菌的选择培养基。 2. 麦康凯琼脂由于含有胆酸盐，能抑制革兰氏阳性菌生长，有利于大肠杆菌和沙门氏菌的生长。 0.1 ml 加入BHI或者TSB 麦康凯平板 血平板 乳腺炎奶样 葡萄球菌 TSB SS，EMB 革兰氏染色 营养琼脂 初步判断大肠杆菌 链球菌 10% NaCl TSB BHI or THB BHI 琼脂 MIC测定 纸片法药敏 提取基因组 16S rRNA鉴定 耐药基因检测 MLST分型 耐药基因检测 提取基因组 16S rRNA鉴定