冰冻切片实验步骤.docVIP

全部实验步骤 1 取新鲜组织于4%多聚甲醛固定24小时 2 30%蔗糖脱水48小时以上 3 -250C包埋（冰冻切片机内） 冰冻切片 冰冻切片步骤 冰冻切片免疫组化染色步骤：冰冻切片4~8μm，室温放置30分钟后，入4丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3次。用3%过氧化氢孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗，5分钟×2次。下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤。(见我发的前面的帖子)你确定你是冰冻切片吗？？？冰冻切片不能用热修复啊！！！以下是我的步骤：1 冰冻切片室温放置30分钟后，入4丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3。用3％过氧化氢孵育5~10分钟，PBS洗，5分钟×2。2 5~10％正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37孵育1~2小时或4过夜。3 PBS冲洗，5分钟×3次。4 滴加滴加第二代生物素标记二抗工作液，37或室温孵育30分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。5 滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37或室温孵育10~30分钟。6 PBS冲洗，5分钟×3次。7 显色剂显色（DAB）。8 自来水充分冲洗，复染，封片。冰冻切片免疫组化染色用的灭活内源性过氧化物酶，最好是用3%H2O2/甲醇溶液，室温20分钟。此配方不易产生脱片。配制方法是在9