第四章蛋白质化学第六节蛋白质及氨基酸的分离纯化与测定技术分析.pptVIP

* （五）利用配体的特异性亲和力的纯化方法 亲和层析是利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别能力，也即生物学亲和力，建立起来的一种有效的纯化方法。 亲和层析经常只需要经过一步的处理即可将某种所需蛋白质从复杂的混合物中分离出来，并且纯度相当高。 亲和层析最先用于酶的纯化并从中得到发展， 亲和层析（affiuity chromatography） 应用 分离纯化酶、 抗原、抗体 分离纯化核酸 研究酶的结构与功能 + 待纯化分子 配体 a. 理论依据：待纯化分子和配体间具有亲和性 + 基质 b. 活性基质与配体结合产生亲和吸附剂 + + 杂质 c. 待纯化分子与亲和吸附剂结合，与杂质分离 + d. 偶联复合物经解离后，得到纯的待纯化分子 原理： 基质 纤维素、聚丙烯酰胺凝胶、 sepharose、sephadex 亲和层析原理示意图 蛋白质混合物 配体 与配体结合的蛋白质 加入的可溶性配基 专一性结合蛋白质 没有结合的蛋白质 非专一性结合蛋白质 蛋白质浓度 洗脱体积 与配体专一性结合蛋白质 加入配基 基质 * 四、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 1.蛋白质的含量测定的方法 凯氏定氮法 双缩脉法 Folin一酚试剂法（Lowry法） 紫外吸收法染料结合法（Bradford法）