植物细胞实验讲义说明.docVIP

配制MS培养基时母液的计算 类别 成分 规定量 (mg/L) 称取量 (g/L) 母液体积 （mL） 扩大倍数 配1L培养基取的量（mL） MS大量 KNO3 1900 38.00 1000 20 50 NH4NO3 1650 33.00 KH2PO4 170 3.40 MgSO4-7H2O 370 7.40 CaCl2-2H2O (CaCl2) 440 8.80 (6.64) 类别 成分 规定量 (mg/100ml) 称取量(mg/100ml) 母液体积 （mL） 扩大倍数 配1L培养基取的量（mL） MS微量 MnSO4-4H2O 22.3 2230 100 1000 1 H3BO3 6.2 620 ZnSO4-7H2O 8.6 860 KI 0.83 83 NaMoO4-2H2O 0.25 25 CuSO4-5H2O 0.025 2.5 CoCl2-6H2O 0.025 2.5 MS有机 VB1 0.1 10 100 1000 1 VB6 0.5 50 烟酸 0.5 50 甘氨酸 2 200 铁盐 FeSO4-7H2O 27.8 2.78 500 100 10 Na-EDTA 37.3 3.73 分别溶解后加在一起 肌醇 0.10g/L 实验一 MS培养基母液及其它试剂的配制与保存 一 实验目的 二 实验原理 三 实验器具和药品 四 实验内容： 1． MS培养基母液的配置 2． 激素的配制： 生长素：NAA，IBA，2,4-D，IAA 细胞分裂素： 6-BA，KT 激素配置浓度 0.2mg/ml；每种激素配置100ml NAA、IBA、IAA一般可先用少量95%酒精助溶， 2,4-D可用0.1mol／L的NaOH或KOH助溶； 细胞分裂素类一般先用少量1mol／L盐酸溶解后，再加入温水冷却后定容。 3. 其它试剂的配置 灭菌馏水mol／L NaOH 100ml 分装成2份 至胶头滴瓶 1mol／L盐酸 50ml 至胶头滴瓶 70% 乙醇 500ml 0.1%升汞 500ml 每组任务分解： 第一组：大量无机盐；1mol／L NaOH ；2,4-D； 第二组：微量无机盐；NAA；70% 乙醇 第三组：有机物；1mol／L盐酸；6-BA； IAA 第四组：铁盐； IBA； 0.1%升汞； KT 4母液的保存 1）装瓶 将配置好的母液分别倒入瓶中，母液瓶上贴好标签，注明母液号， 配置倍数与配置日期。 2）储藏 将母液瓶储放在冰箱内备用。 注意： 1．清洗器皿必须经三道程序：洗涤剂-自来水-蒸馏水。 2．所配试剂全部贴上标签，注明试剂名称、浓度、日期。 3．锥形瓶瓶口至少用两层牛皮纸扎紧（装有试剂需灭菌时，须两层牛皮纸中间夹层锡箔） 4．有螺口的瓶高压灭菌时不能拧得太紧，稍微拧松放入高压锅，灭菌完成后再拧紧瓶口。 5．装试剂的细口瓶灭菌时，注意盖瓶塞，包牛皮纸。 实验二 培养基制备与灭菌 实验目的 学习用母液法配制MS培养基以及掌握高压蒸汽灭菌的一般操作技术。 二、 实验原理 三、 材料与用具 配制MS培养基的各种母液、植物激素母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、三角瓶、量筒、定容瓶、电炉或微波炉、酸度计或pH试纸、1mol/L的NaOH、1mol/L的HCl、培养瓶、标签、铅笔、高压灭菌锅（手提式和全自动），烘箱等。 四、 实验方法及步骤 1. 培养基配制 每组配制培养基500 ml。 (1) 每组取烧杯一只，分别量取大量元素、微量元素、铁盐、有机物质成分置于烧杯中备用（注意：移液管不能混用）。 吸取量＝需要配制培养基的体积*（需要配制浓度/母液浓度） MS + 2.0mg/L BA + 0.5mg/L NAA＋30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8） MS + 1.0mg/L BA + 0.1mg/L NAA＋30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8） MS + 0.5mg/L BA + 0.5mg/L NAA＋30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8） MS + 2.0 mg/L BA + 0.5mg/L IAA＋30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8） MS + 0.2mg/L BA + 1 mg/L2,4-D＋2 mg/L NAA +30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8） MS + 0.1mg/L BA + 2 mg/L2,4-D+30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8） 每个组各配制1-4号培养基各500ml， 此外，第一、二组配制5号培养基，第三、四组配制6号培养各500